摘要
目的：探讨端粒酶逆转录酶(TERT)基因位点rs2736098多态性与中国人群肝外胆管癌易感性之间的关系，寻找影响胆管癌发病的基因位点。 方法：研究对象为北方地区汉族人群，并且相互之间无血缘关系。经过中国医科大学附属盛京医院伦理委员会同意，并获取了所有患者的知情同意后，留取外周血标本，同时完成流行病学调查。采用病例对照原则，病例组200名来自中国医科大学附属盛京医院，有明确病理诊断或临床诊断的新发肝外胆管癌患者，既往无肿瘤病史，无放化疗病史。对照组200名来自同期中国医科大学附属盛京医院体检中心的健康人群。所有病例和对照均在2012年9月至2014年12月期间收集，同时收集参与者的流行病学信息。 所有参与研究的个体外周血标本采集使用枸橼酸钠抗凝试管，每人采血约2ml，用酚-氯仿法提取基因组DNA。采用Taqman real-time PCR方法及SDS（美国应用生物系统公司）软件程序进行单核苷酸多态性的基因分型。在每个96孔检测单元中分别设立阴性对照和重复标本作为质量控制;阴性对照中不加模板DNA，而以双蒸水代替，用于检验是否存在PCR污染。每个SNP的信号强度需在两个尺度上满足形成三个明显的簇，随机选择10％的样本进行盲法重复测量。PCR反应体系共5μl，包括2X Taqman Master Mix2.5μl，20X引物与探针混合物0.25μl，H201.25μl，DNA1.00μl。PCR扩增:95℃预变性10min;92℃变性30秒，60℃退火以及延伸1分钟;共47个循环。以SDS（美国应用生物系统公司）软件Allelic Discrimination程序进行终点分析，判断待测样本的多态性基因型。利用SPSS19.0软件进行数据整理分析，所有的统计检验均以P＜0.05为有统计学显著性差异。 以x2检验比较人口学特征、相关危险因素暴露及SNPs基因型在病例与对照之间分布的差异;以拟合优度x2检验对照的Hardy-Weinberg分布平衡情况;以单因素和多因素logistic回归计算比值比(odds ratio，OR)及95％可信区间(confidenceinterval，CI)。 结果：TERT基因位点rs2736098多态性与胆管癌易感性:所有病例调整年龄和吸烟状态后，发现携带有TERT基因rs2736098位点T/T基因型的人比携带有C/C基因型的人患胆管癌的风险明显升高(P=0.01 OR=1.33)，合并C/T、T/T后仍有统计学差异(P=0.016，OR=4.28); 结论：1、发现hTERT基因rs2736098位点多态性与胆管癌易感性相关，其携带T等位基因增加了胆管癌的发病风险。
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