摘要
目的:力达霉素是一种烯二炔类抗肿瘤抗生素，它对多种肿瘤细胞有强烈的杀伤作用。利妥昔是一种用于治疗恶性肿瘤的单克隆抗体药物，适应症为B细胞非霍奇金淋巴瘤。研究表明，利妥昔单抗与化疗药物、力达霉素联合多种化疗药物对肿瘤细胞均有较好的协同效果。本研究主要探讨力达霉素与利妥昔单抗联合抗人B细胞淋巴瘤的作用和机制。 方法:以人B细胞淋巴瘤细胞株Raji和Ramos为模型，通过MTS法研究力达霉素、利妥昔单抗以及联合方案对肿瘤细胞的增殖抑制作用。PI染色后用流式细胞术检测细胞周期分布的变化。采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡比率。Western Blot检测凋亡相关蛋白以及相关信号通路蛋白的表达量变化。最后用人B细胞淋巴瘤裸鼠模型验证该联合方案对淋巴瘤的体内抑制作用。 结果:利妥昔单抗在体外单独处理Raji和Ramos细胞48h，结果其抑制率较低，且没有剂量依赖性。利妥昔单抗与力达霉素同时联合处理Raji和Ramos细胞48h，联合效果不明显。利妥昔单抗预处理细胞48h后，再与力达霉素联合处理的方案各组联合效果较好，有两种浓度的联合方案增效指数小于0.7。流式细胞术分析细胞周期分布，结果显示作用24h后，预处理联合方案各组与力达霉素单药组相比，单药组有更显著的G2/M阻滞;而联合方案各组G2/M阻滞降低并有一定的G1阻滞。流式细胞术分析细胞凋亡比率发现，预处理联合方案组的细胞凋亡比率显著多于力达霉素单药组。Western Blot结果显示，相比力达霉素单药组，预处理联合组明显诱导Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9和PARP的剪切形式的升高，而凋亡抑制作用的cIAP-2和Bcl-2表达降低。pEGFP-N1质粒转染Ramos细胞筛选得到稳定细胞株后，尾静脉接种BALB/c小鼠并加药处理，结果显示，联合处理组小鼠生存时间明显高于对照组和单药组;小动物活体成像分析显示，相比对照组、利妥昔单抗单药组和力达霉素单药组，预处理联合组小鼠肿瘤的脾和淋巴结转移富集程度明显降低。 结论:力达霉素联合利妥昔单抗对人B细胞淋巴瘤在体内和体外均有较好的协同效果，这可能与利妥昔单抗通过调节细胞Bcl家族和IAP家族蛋白水平从而逆转肿瘤耐药性，增强力达霉素诱导凋亡作用有关。
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