摘要
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2，PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrom，PMWS）、猪皮炎与‘肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、猪繁殖障碍、猪先天性振颤等疾病的主要病原之一。病毒感染诱导宿主产生免疫抑制，免疫力大大降低，引起多种病原微生物的继发或并发感染，给养猪业造成难以估量的损失。 为了检测本地区的PCV2的流行情况，本研究采集了江苏部分地区病死猪样品及规模化屠宰场样品并使用PCR的方法检测猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病毒(PRRSV)六种常见病原。利用Dulac细胞对PCV2检测为阳性的样品进行病毒分离纯化，对分离到的PCV2毒株测序并做遗传进化分析。 PCV2的致病机理一直是研究的热点，但是PCV2的单独感染并未表现出明显的临床症状，而研究PCV2的感染动物模型常为价格昂贵、饲养困难的SPF猪。为选择理想的实验动物对PCV2致病性进行进一步研究，本研究选取了BALB/c小鼠作为实验动物，通过荧光定量PCR、间接免疫荧光等方法监测PCV2在小鼠体内的分布，并通病理切片研究PCV2对小鼠组织的损伤，为PCV2的BALB/c小鼠动物模型提供一定的参考。 第一章 猪圆环病毒2型的分离鉴定及几种常见病原的流行病学调查 通过PCR的方法对扬州大学动物医院采集的江苏部分地区的234份病死猪病料与规模化屠宰场采集的205份肺门淋巴结进行检测，结果显示:从动物医院采集的234份病死猪样品中检测到123份病料为PCV2阳性，阳性率为52.6％;27份病料为PCV1阳性，阳性率为11.5％;34份病料为PRV阳性，阳性率为14.5％;25份病料为PPV阳性，阳性率为10.7％;12份病料为PRRSV阳性，阳性率为6.0％;12份病料为CSFV阳性，阳性率为5.1％。从规模化屠宰场采集的205份肺门淋巴结中，分别检测到119份PCV2阳性，35份PCV1阳性，5份PPV阳性，2份PRV阳性，阳性率分别为58.1％，15.1％，2.4％和0.97％，未检测到CSFV和PRRSV。混合感染统计中PCV1和PCV2的混合感染最为严重，共有45份，占总数的10.2％; PCV2和PRV混合感染共有13份，占总数的2.9％;PCV2和PPV的混合感染共有12份，占总数的2.7％; PPV/PRV，PCV1/PCV2/PPV，PCV1/PCV2/PRV的混合感染均为3份，占总数的0.7％。本文从PCV2检测阳性的样品中分离到9株PCV2毒株，对这9株PCV2进行测序并绘制遗传进化树。结果表明，分离到的9株PCV2全长均为1767 bp，其中6株属于PCV2b1C亚型，3株属于PCV2b1B亚型。分离到的9株PCV2同源性为96.0％～99.9％。 第二章 猪圆环病毒2型对BALB/c小鼠的致病性研究 为研究PCV2对BALB/c小鼠的致病性，从本文分离到的PCV2毒株中选取了140316259、140729、140820和140502四个和实验室保存的121108和130405两个毒株分别接种Dulac细胞，通过测定病毒接种后第1，2，3，4，5，6，7代细胞毒的TCID50和DNA拷贝数来比较不同毒株在该细胞上复制情况的差异。同时为研究PCV2在体内的致病性，选择140316259、140729、140820和14111106四个毒株感染4周龄BALB/c小鼠并用140316259毒株感染32日龄仔猪，通过IFA，荧光定量PCR，病理组织切片等方法比较PCV2对猪和BALB/c小鼠致病性的差异。 研究结果表明:六个PCV2毒株均能稳定的在Dulac细胞上生长。动物实验中，攻毒BALB/c小鼠和试验猪均能感染PCV2，感染后均出现了病毒血症，小鼠攻毒后第35 d剖检发现，攻毒组小鼠颈部淋巴结明显增大。病理组织切片表明:攻毒PCV2的小鼠心、肝、肺、肾等器官出现上皮细胞凋亡坏死、水肿、淋巴细胞浸润出血等病理变化。 从本文研究结果来看，BALB/c小鼠人工感染PCV2后能够检测到病毒血症并产生针对PCV2的抗体，病理组织切片结果也显示PCV2能够引起BALB/c小鼠产生一定的病变，由此可以认定BALB/c小鼠可以感染PCV2并可能作为研究PCV2致病性的动物模型。
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