摘要
中药材质量的均一性及其制剂工艺的稳定性是决定中药制剂质量均一性的关键。而中药材的品种、产地、采收期及贮藏期等条件的不同使得中药材质量产生差异，影响其制剂质量的稳定。本课题组以黄芩药材入手，之前采用红外光谱三级鉴别法和主成分分析法对不同品种、产地、采收期及贮藏期的黄芩进行分析，其红外光谱能够反应不同样品中物质基础的差异性特征和总体物质基础的变化。现采用液质联用技术分析不同品种、产地、采收期及贮藏期的黄芩药材，来确定其代谢组学中各化学组分与其含量之间的关系，并建立液-质联用的代谢组学的标准谱库，以期运用多种分析手段，建立特定的黄芩药材质量标准，为揭示临床用药标准与疗效之间的关系打下基础，为道地中药材质量的规范化提供理论依据。 第一部分不同采收期黄芩中黄酮类成分的研究 目的： 采用高效液相色谱-质谱法分析不同采收期黄芩中黄酮类成分，为黄芩采收期的建立提供参考。 方法： 采用Agilent Zorbax XDB-C18柱（2.1 mm×150 mm，3.5μm）；流速0.2 mL·min?1；进样量2μL；柱温25℃；检测波长276 nm；流动相为0.1%甲酸-水和乙腈，梯度洗脱；电喷雾离子源；多反应监测模式；正离子模式检测；电喷雾电压3500 V，雾化气压力25 psi；干燥气体积流量10 L·min?1；离子源温度350℃。 结果： 高效液相色谱-质谱法测得不同采收期黄芩中黄酮类化合物含量不同，赤峰春季从一年生到三年生采收的黄芩中黄芩苷含量由12.89%下降为1.93%，汉黄芩苷含量由3.48%下降为0.68%，黄芩素含量由0.79%下降为0.26%，汉黄芩素含量由3.03%下降为1.46%，白杨素含量由0.019%下降为0.010%，千层纸素含量由0.057%下降为0.029%。赤峰秋季从一年生到三年生采收的黄芩中黄芩苷含量由12.48%下降为11.76%，汉黄芩苷含量由3.25%下降为0.55%，黄芩素含量由0.34%上升为2.73%，汉黄芩素含量由1.70%上升为6.16%，白杨素含量由0.009%上升为0.062%，千层纸素含量由0.037%下降为0.175%。山东秋季从一年生到两年生采收的黄芩中黄芩苷含量由10.00%上升为12.98%，汉黄芩苷含量由1.25%上升为2.57%，黄芩素含量由1.18%下降为0.82%，汉黄芩素含量由4.72%下降为3.34%，白杨素含量由0.015%下降为0.011%，千层纸素含量由0.035%下降为0.030%。 结论： 赤峰产黄芩中6个黄酮类化合物含量随着采收期的增加整体呈下降趋势，山东秋季产黄芩中6个黄酮类化合物含量随着采收期的增加有升有降。本实验可以初步反映出不同产地及不同采收期的黄芩质量确实有所差别，可以为确定黄芩药材的产地及采收期提供参考。 第二部分不同贮藏期黄芩中黄酮类成分的研究 目的： 采用高效液相色谱-质谱法分析室温条件下黄芩药材的贮藏稳定性，为黄芩贮藏期的建立提供参考。 方法： 同第一部分。 结果： 高效液相色谱-质谱法测得随着贮藏时间的推移，贮藏18个月后黄芩中黄芩苷含量由8.86%下降为8.03%，汉黄芩苷含量由0.50%下降为0.39%，黄芩素含量由2.08%下降为1.60%，汉黄芩素含量由0.52%下降为0.40%，白杨素和千层纸素含量在贮藏3个月时含量由0.04%下降为0.03%，贮藏3个月到18个月含量变化不明显。 结论： 随着贮藏时间的推移，黄芩中主要黄酮类化合物含量整体呈下降趋势。本实验可以反映不同贮藏期黄芩的质量，可以为制定黄芩药材的贮藏期提供参考。 第三部分紫外检测器与质谱检测器的适应性比较 目的： 采用高效液相色谱法对紫外检测器和质谱检测器进行适应性比较，用其结果判断两种检测器测得的化合物的定量结果的准确性，为提高黄芩及其制剂质量标准提供理论依据，也为进一步提高其它中药的质量标准提供参考。 方法： 采用Agilent Zorbax XDB-C18柱（2.1 mm×150 mm，3.5μm）；流速0.2 mL·min?1；进样量2μL；柱温25℃；检测波长276 nm；流动相为0.1%甲酸-水和乙腈，梯度洗脱，电喷雾离子源；多反应监测模式；正离子模式检测；电喷雾电压3500 V，雾化气压力25 psi；干燥气体积流量10 L·min?1；离子源温度350℃。 结果： 紫外检测器和质谱检测器用于黄芩中主要黄酮类成分含量的测定，通过方法学比较，这两种检测器均具有很高的精密度和稳定性，但质谱检测器的灵敏度比紫外检测器高10倍以上，此外，质谱检测器是根据保留时间 tR和质荷比 m/z两项指标来确定未知化合物，对于某些用紫外检测器不能得到良好分离的组分或在紫外图谱上保留时间与对照品相近的其它成分，质谱检测器具有更高的选择性和专属性。 结论： 质谱检测器与紫外检测器在测定中药中化合物的含量时各有其优缺点。不同的化合物应选择不同的最适的检测器，确定最适的含量测定方法。本实验可以为其它中药及其制剂中化合物的含量测定方法的确立提供参考。 第四部分谱库的建立、检索与应用 目的： 利用高效液相色谱-电喷雾离子肼串联质谱建立含多个化合物的液相色谱-质谱-数据库，并验证该谱库检索结果的可信度。 方法： 采用HPLC-DAD-MS/MS电喷雾交替离子模式进行检测，选用Agilent Zorbax XDB-C18柱（2.1mm×150mm，3.5μm），流动相为0.1%甲酸溶液和乙腈，线性梯度洗脱，流速为0.2 mL·min?1，柱温25℃，检测波长200~400nm；毛细管电压3500 V；目标质量数300；化合物稳定性扫描范围 m/z100~1200。 结果： 建立了黄芩苷、黄芪甲苷、大黄素等30多种中药中天然化合物的LC-MS-DS，以上各对照品的谱库检索结果匹配度P、F、R分别为995、996、1000，986、985、985，993、993、1000等。各对照品谱库检索结果的匹配度都很高。 结论： 本研究建立的液相色谱-质谱-数据库的检索结果具有很高的可信度，为中药中化合物的快速识别提供了有效的方法。
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