摘要
研究背景：系统性红斑狼疮（SLE）是一种多发于生育年龄女性、累及多脏器的自身免疫性炎症性疾病，其特征为 B细胞异常活化，产生大量的自身抗体，形成免疫复合物在组织沉积，或抗体直接与组织细胞抗原作用，引起细胞破坏，造成广泛组织损伤及机体多系统损害。SLE的病因及发病机制至今仍未完全阐明，B细胞异常被认为是 SLE发病的中心环节之一。一般认为B细胞主要通过产生特异性抗体或多种细胞因子等发挥上调免疫反应的作用，也可作为专职抗原呈递细胞参与免疫应答。但近年的研究发现，缺乏 B细胞和CDl9-/-的小鼠在实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)小鼠模型中疾病更加严重，并且在T细胞介导的炎症反应实验中，CDl9-/-小鼠表现了更为严重的接触性超敏反应(CHS)。由此推断，B细胞在负性调节中亦起到了很大作用，与T细胞一样，B细胞中也存在调节性的细胞亚群。2002年Mizoguchi等在慢性炎症性肠病鼠模型中发现CD1d+的B细胞亚群可分泌IL-10,并抑制疾病进展，并首次开始使用调节性B细胞(Bregs)这个术语。Bregs通过分泌IL-10和TGF-β1发挥负性调节作用。其中产生IL-10的Breg细胞被称为B10细胞。其调节自身免疫性疾病的作用可概括为：自身抗原刺激B10前体细胞，在LPS等条件下发育为成熟B10细胞，后者主要通过分泌IL-10等细胞因子抑制巨噬细胞、APC及Th细胞活化，减少TNF-α、IL-1及IL-6等炎症性细胞因子分泌，下调巨噬细胞吞噬作用，降低APC共刺激分子合成释放，同时抑制Th1细胞活化，从而发挥在自身免疫性疾病中的负向调节作用。IL-10一方面抑制单核巨噬细胞炎症介质的释放及抑制单核巨噬细胞的抗原递呈作用、增强抗炎性因子释放，同时IL-10并抑制IL-12合成的作用，以此阻碍Th1免疫反应。另一方面IL-10可诱导初始T细胞向Tregs转化，其诱导产生的Tregs也可以作用于APCs和DC细胞等发挥免疫抑制功能。 近年来多个SLE动物模型提示均有Bregs细胞数量减少或功能缺陷导致IL-10和TGF-β1分泌的减少，移植具有分泌IL-10功能的Breg细胞可使病情缓解。因此，分泌IL-10的调节性B细胞（B10细胞）的作用尤为重要，细胞内IL-10染色是B10细胞鉴定方式之一，同时有研究发现CD19+CD24hiCD38hi是分泌IL-10的调节性 B细胞的主要细胞表型。研究 Bregs细胞及其效应的细胞因子在 SLE患者中的表达情况，对了解其在 SLE发病过程中参与的角色及发挥的作用有重要意义。本研究采用流式细胞术检测 SLE患者和健康对照者外周血中CD19+IL-10+细胞及CD19+CD24hiCD38hi细胞的比例，同时应用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-10水平，分析其与疾病活动的关系，探讨Bregs细胞及其效应细胞因子在SLE发病机制中的作用。 研究目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血中调节性Bregs的表达，探讨Bregs细胞在SLE发病机制的作用。 研究方法：选择60例SLE患者（其中活动期38例，稳定期22例）和20例健康对照者为研究对象，分离外周血单个核细胞(PBMC)，以CD40L及 CPG寡核苷酸刺激 PBMC并进行培养，用流式细胞术分析外周血CD19+IL-10+Breg细胞和CD19+CD24hiCD38hi Breg细胞的表达；ELISA方法检测培养上清中白细胞介素（IL）-10的水平。 研究结果： 一、CD19+IL-10+细胞检测结果 1、外周血CD19+IL-10+细胞的表达：SLE患者外周血CD19+IL-10+细胞的表达（1.86±0.80）%较正常对照组（4.36±1.00）%减少，其中活动期SLE患者外周血中CD19+IL-10+细胞的表达率为（1.54±0.64）%，均低于稳定期SLE患者（2.42±0.75）%和正常对照组（4.36±1.00）%；而稳定期SLE患者组外周血中CD19+IL-10+细胞的表达率亦低于正常对照组。 2、外周血CD19+IL-10+细胞的表达与疾病活动程度的相关性：SLE患者外周血CD19+IL-10+细胞的表达与SLEDAI评分呈负相关。同时，外周血CD19+IL-10+细胞的表达与补体C3及C4呈正相关。 二、CD19+CD24hiCD38hi细胞检测结果 1、外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达：SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达（1.53±0.63）%较正常对照组（3.14±0.87）%减少，其中活动期SLE患者外周血中CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达率为（1.26±0.45）%，均低于稳定期SLE患者（2.01±0.61）%和正常对照组（3.14±0.87）%；而稳定期SLE患者组外周血中CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达率亦低于正常对照组。 2、外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞表达率与CD19+IL-10+细胞表达率的相关性：SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达与CD19+IL-10+细胞呈正相关。 3、外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达与疾病活动程度的相关性：SLE患者外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达与SLEDAI评分呈负相关。同时，外周血CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达与补体C3及C4呈正相关。 三、IL-10水平检测结果 1、细胞培养上清液IL-10水平的测定：SLE患者细胞培养上清液IL-10水平（5.40±2.78）pg/ml较正常对照组（10.64±3.57）pg/ml减少，其中活动期SLE患者细胞培养上清液IL-10水平为（4.68±2.30）pg/ml，均低于稳定期SLE患者（6.64±3.141）pg/ml和正常对照组（10.64±3.57）pg/ml；而稳定期SLE患者组细胞培养上清液IL-10水平亦低于正常对照组。 2、细胞培养上清液IL-10水平与Breg细胞表达率的相关性：SLE患者细胞培养上清液IL-10水平与CD19+IL-10+细胞的表达率呈正相关，与CD19+CD24hiCD38hi细胞的表达率呈正相关。 3、细胞培养上清液IL-10水平与疾病活动程度的相关性：SLE患者细胞培养上清液IL-10水平与SLEDAI评分呈负相关。同时，细胞培养上清液IL-10水平与补体C3及C4呈正相关。 研究结论：活动期SLE患者外周血中CD19+IL-10+Breg细胞和CD19+CD24hiCD38hi Breg细胞显著降低，提示调节性B细胞可能参与SLE的发病。
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