摘要
核不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)是hnRNP蛋白家族成员，在肿瘤细胞增殖与凋亡过程中具有重要作用。本实验为了探究hnRNP A2/B1蛋白在乳腺癌组织中的表达及其在乳腺癌细胞中的定位。研究hnRNP A2/B1在乳腺癌细胞中所涉及的主要功能、信号通路以及可变剪接和蛋白融合过程，并探究hnRNPA2/B1对细胞增殖、凋亡、迁移等生物功能的影响。从而阐明hnRNP A2/B1在乳腺癌中的作用机制，为肿瘤的机理研究、临床诊断和治疗提供一个新靶点。本实验用免疫组化方法检测hnRNPA2/B1在大鼠乳腺组织中的变化，并结合免疫荧光检测hnRNPA2/B1在姜黄素诱导人乳腺癌细胞凋亡过程中的定位变化。通过构建hnRNP A2/B1蛋白稳定沉默的乳腺癌细胞株，进而进行转录组测序并通过生物信息分析hnRNP A2/B1所参与的生物功能、信号通路、对其他基因可变剪接的影响以及融合蛋白的形成过程。通过MTT、流式细胞、划痕和Transwell小室迁移实验分别检测了hnRNP A2/B1沉默对细胞增殖、凋亡、迁移的影响。并用免疫印迹和real-time PCR检测了增殖、凋亡、迁移相关的基因变化。利用裸鼠实验进一步验证hnRNP A2/B1在体内的生物功能。 实验结果显示hnRNP A2/B1在大鼠乳腺癌组织中表达增加，其主要定位在人乳腺癌细胞MDA-MB-231的核内，经姜黄素诱导凋亡后发生向胞质转移的现象。转录组测序发现，hnRNP A2/B1沉默后，蛋白结合、序列特异性DNA结合、钙离子结合、转录因子TFIID复合物、细胞黏附、生物黏附相关功能发生变化，酪氨酸代谢、基质细胞癌、癌症、Wnt、MAPK等通路发生变化，基因EFCAB4A、WASH7P、CHID1发生可变剪接变化并参与一些基因融合。此外，细胞实验检测发现在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中沉默hnRNP A2/B1后激活了ERK1/2通路，促进细胞增殖但效果不明显;促进细胞凋亡，抗凋亡基因Bcl-2表达下降，促凋亡基因p53表达上升。hnRNP A2/B1沉默后，促进细胞迁移，细胞间粘附性减弱。EMT相关基因E-cadherin表达下降，Twist、Snail、Vimentin表达上升，侵袭相关基因MMP-9表达增加。体内实验进一步证实沉默hnRNP A2/B1后促进肿瘤生长。 研究结果表明hnRNP A2/B1在乳腺癌中表达增加，主要定位在细胞核内。hnRNP A2/B1抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移以及细胞凋亡。hnRNP A2/B1参与蛋白结合、序列特异性DNA结合、钙离子结合、转录因子TFIID复合物、细胞黏附、生物黏附等生物功能以及酪氨酸代谢、基质细胞癌、癌症、Wnt、MAPK等信号通路。hnRNP A2/B1参与基因EFCAB4A、WASH7P、CHID1的可变剪接。
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