摘要
牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosaAndr．的干燥根皮，味苦，辛，性微寒，具有清热凉血，活血散瘀的功效，用于阴虚发热，瘀血闭经等。临床上有清热凉血活血化瘀功能，常用于热入营血，温毒发斑等症，对于无汗骨蒸，经闭，疮毒也有一定的疗效。牡丹皮炭为干燥根皮的炒炭品，其药性寒，味酸辛，入心、肝、肾经。具有凉血止血的作用，可用于吐血、崩漏及其它多种血热出血证，牡丹制炭之后，其寒凉之性缓和，止血作用增强，常用于血热出血等。牡丹皮经炒炭之后产生相反的作用：凉血活血→凉血止血，其功效的改变必然药效成分及其体内作用过程相关。故本项目从牡丹皮炭炮制工艺、质量控制及其代谢组学方面进行研究。 第一牡丹皮炭炮制工艺的研究。采用 Box-Behnken响应面分析法优化牡丹皮炭的最佳炮制工艺。炮制时，采用砂烫法，以没食子酸、5-羟甲基糠醛、儿茶素、丹皮酚含量的加权评分为指标，以炮制时间，炮制温度，投料比做单因素实验，在此基础上采用Box-Behnken响应面法优化牡丹皮炭炮制的最佳工艺。牡丹皮炭炮制的最佳工艺为：炮制时间为9.0 min，炮制温度为180.0℃，投料比为25.5倍；四个成分含量加权评分响应值的预测值为95.081，实测平均值为94.314，与预测值接近。 第二牡丹皮炭的质量控制。通过应用亚甲基蓝色素吸附法和磷钼钨酸比色法对牡丹皮炭进行测定，得到牡丹皮炭的色素对亚甲基蓝的吸附力建议不得低于7.7 mg.g-1、鞣质含量建议不低于0.81 mg.g-1。利用紫外谱线组法及紫外谱线组的吸收峰数及峰位置对牡丹皮和牡丹皮炭不同炮制程度及其不同极性部位的紫外谱线图谱进行研究，结果牡丹皮及其炮制品的紫外谱线组的吸收峰、峰位及吸收度具有明显差异。通过应用HPLC法测定牡丹皮及其不同炮制程度炭药中的5-羟甲基糠醛，没食子酸，儿茶素，丹皮酚的含量，结果发现，没食子酸和5-羟甲基糠醛的含量随炮制时间延长而增加，但一定程度后开始下降；儿茶素和丹皮酚的含量则下降。 第三牡丹皮炭给药后的血清代谢物的1H-NMR代谢组学研究。采用核磁共振( NMR)技术对人体的血清进行测试分析，应用偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)研究比较正常人体服用牡丹皮炭前后血清之间的代谢谱差异，通过比较代谢物的差异。发现正常人体服用牡丹皮炭前后的血清在1H-NMR中出现的特征峰有明显差异，为牡丹皮炭在人体的作用机制及临床应用提供了科学依据。 第四牡丹皮炭对血热出血大鼠的血清、尿液的代谢组学的研究。采用乙醇灌胃/自由饮用结合皮下注射干酵母造成血热出血大鼠模型。取血清和尿液进行1H-NMR分析测定，选择PLS-DA对大鼠尿液、血清的内源性代谢物质进行分析。通过变量重要性投影（VIP）和矫正率筛选出牡丹皮炭凉血止血的药效生物标志物，初步筛选出与血热出血症相关的生物标志物有其中3-羟基丁酸、乙酰乙酸、肌酸、乳酸、丙氨酸、牛磺酸、甘氨酸、胆碱、色氨酸、葡萄糖、甲酸、络氨酸、二甲基色胺、天冬氨酸等为牡丹皮炭凉血经止血的药效生物标志物。牡丹皮炭可显著影响血热出血的大鼠尿液、血清的相关物质的代谢作用，为进一步阐释牡丹皮炭凉血止血的机理提供了依据。
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