摘要
水稻是一种重要的粮食作物，但其安全生产常受到病害的侵扰。水稻黑条矮缩病（Rice black-streaked dwarf disease，RBSDD）是其中危害最为严重的病毒病之一，主要分布于日本、朝鲜、越南、中国等水稻种植区。迄今为止，已发现该病害可由2种病毒单独或复合侵染所致。一是水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)，是呼肠孤病毒科斐济病毒属确定成员，主要传播媒介是灰飞虱;另一种是近年新发现的水稻新病毒——南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streakeddwarf virus，SRBSDV），又名水稻黑条矮缩病毒2号(Rice black-streaked dwarf virus2，RBSDV-2)，是呼肠孤病毒科斐济病毒属暂定成员，主要通过白背飞虱传播。二者症状相似性、分布上的重叠性、田间侵染的复杂性使得检测与诊断更加困难，而对病株和带毒昆虫的快速准确检测，对该病害的流行预测和监控又是极为关键的。因此，本研究主要开展了有关二者检测方法的研究，并取得了以下结果: 1、血清学方法:在克隆水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）P8基因的基础上，通过原核表达纯化了RBSDV P8蛋白，并制备了P8蛋白的多克隆抗体。ELISA和Western blot分析显示该抗体能特异性地与RBSDV和SRBSDV病株提取物发生强烈的血清学反应。同时在确定该抗体效价的基础上，优化了抗体与抗原的血清学反应时间及显色时间，建立了快速检测水稻黑条矮缩病病原的ELISA和Dot-blot方法体系，并且应用于昆虫带毒率检测分析，为病害防控提供依据; 2、高分辨率熔解曲线（High Resolution Melting Curve，HRM）方法:在本实验室前期大量定量RT-PCR（qRT-PCR）和多重RT-PCR(mRT-PCR)的基础上，针对HRM技术特点，设计了1对引物，优化了反应条件，建立了HRM方法用于同步检测RBSDV/SRBSDV，样品检测结果显示该方法可快速高效地用于RBSDV和SRBSDV检测与诊断。
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