摘要
目的：采用小鼠佐剂性关节炎模型进一步评价黑鳗藤有效成分抗类风湿性关节炎的作用，并通过体外佐剂性关节炎滑膜细胞培养试验，探讨黑鳗藤有效成分抗类风湿性关节炎作用的机制，其最终目标是将黑鳗藤有效成分研究开发成抗类风湿性关节炎的新药。 方法：1.化学成分的提取分离黑鳗藤藤茎的乙醇提取物，用氯仿溶解，可溶部分经硅胶柱层析，得到31个流分，流分27经RP-18柱层析和HPLC分离纯化，得到3个C21甾体苷类化合物。 2.化合物的结构鉴定通过HR-ESI-MS、13C-NMR、1H-NMR、DEPT等现代波谱技术鉴定化合物结构。 3.对小鼠佐剂性关节炎模型的作用采用完全弗氏佐剂制备小鼠佐剂性关节炎模型，通过测定小鼠足肿胀度、胸腺指数与脾脏指数等，评价药物的作用。 4.大鼠滑膜细胞的体外培养试验采用 MTT法测定药物对体外培养正常大鼠以及佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的抑制作用。 结果：1.从黑鳗藤藤茎中分离得到31个流分以及化合物Ⅰ、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ。 2.化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的化学结构：化合物Ⅰ为12-O-乙酰基-20-O-惕各酰基肉珊瑚苷元3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鳗藤新苷 G)，化合物Ⅱ为12-O-乙酰基-20-O-（N-甲基）邻氨基苯甲酰基肉珊瑚苷元3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鳗藤新苷 K)，化合物Ⅲ为12-O-乙酰基-20-O-（N-甲基）邻氨基苯甲酰基二氢肉珊瑚苷元3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-3-O-甲基-6-去氧-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷（黑鳗藤新苷 L）。 3.对小鼠佐剂性关节炎模型的实验表明，黑鳗藤流分Fr22高剂量组（0.1g/kg）、低剂量组（0.05g/kg）、Fr27高剂量组（0.08g/kg）、醋酸地塞米松对照组（0.0008g/kg）对小鼠致炎后的足肿胀度以及胸腺和脾脏指数均显著低于模型对照组（P＜0.01）， Fr25高剂量组（0.12g/kg）、Fr27低剂量组（0.04g/kg）对小鼠致炎后的足肿胀度以及胸腺和脾脏指数均低于模型对照组（P＜0.05），说明Fr22高低剂量组、Fr27高剂量组对小鼠佐剂性关节炎具有显著的治疗作用，而Fr25高剂量组、Fr27低剂量组对小鼠佐剂性关节炎均有治疗作用。同时由表中还可以看出Fr22高剂量组对AA小鼠原发性足肿胀度的作用时间较其他药物更持续。 4.体外细胞培养试验表明，黑鳗藤流分Fr22、Fr22、Fr27和单体化合物Ⅱ能抑制体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖，其中，流分 Fr22、Fr25、Fr27、在480μg/ml的浓度作用下，抑制率分别为74.57%、46.77%、19.31%，化合物Ⅱ在480μg/ml的浓度作用下，抑制率分别为77.39%。 结论：1.从黑鳗藤中分离得到3个C21甾体苷类化合物，通过HR-ESI-MS、1H NMR、13C NMR、DEPT谱等现代波谱分析，确定了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的化学结构，三者均为已知化合物。 2.流分Fr22、Fr25、Fr27对小鼠佐剂性关节炎所引起的炎症以及胸腺和脾脏指数的升高，均有不同程度的抑制作用。 3.流分Fr22、Fr25、Fr27和单体化合物Ⅱ对体外培养的佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖均有抑制作用。
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