摘要
第一部分短期胰岛素泵强化治疗对初发2型糖尿病患者血浆Vaspin水平的影响 目的：观察短期胰岛素泵强化治疗对于初发2型糖尿病(Type2diabetesmellitus，T2DM)患者的血浆内脏脂肪组织来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Visceraladiposetissue-derivedserineproteaseinhibitor，Vaspin)水平的影响，探讨其与胰岛素敏感性的关系。 方法：30例初发T2DM患者(T2DM组)使用胰岛素泵强化治疗2周，采用高胰岛素-正葡萄糖钳夹术评价治疗前后的胰岛素敏感性，并用酶联免疫法测定血浆Vaspin水平及代谢相关指标。 结果：T2DM患者组（T2DM）空腹血浆HOMA-IR、Vaspin水平高于正常糖耐量组(Normalglucosetolerance,NGT)和糖调节受损组(Impairedglucoseregulation，IGR)。经胰岛素泵强化治疗后，T2DM组M值升高(2.99±0.42vs5.10±0.51mg·kg-1·min-1,P<0.05)，HOMA-IR降低[4.28(1.70~6.47)vs2.30(1.09~7.20),P<0.05]，血浆Vaspin水平也显著降低(1.83±0.55vs1.19±0.57ng/ml,P<0.05),并且血浆Vaspin水平的降低与HOMA-IR的改变呈明显正相关。 结论：胰岛素泵强化治疗可有效改善T2DM患者的胰岛素敏感性，降低血浆Vaspin水平；并且T2DM患者胰岛素敏感性与血浆Vaspin水平有关。 第二部分TSLC1基因过表达对小鼠肝脏和脂肪细胞糖-脂代谢的影响 目的：探讨肺癌肿瘤抑制物-1（Tumorsuppressorinlungcancer-1，TSLC1）基因过表达对小鼠肝细胞Hepa1-6和脂肪细胞3T3-L1糖-脂代谢相关基因的影响。 方法：扩增小鼠TSLC1基因编码区并构建pIRES2-EGFP-TSLC1过表达载体。将上述重组载体分别转染小鼠Hepa1-6肝细胞和3T3-L1脂肪细胞。采用实时荧光定量PCR技术检测各组细胞内TSLC1基因mRNA表达，以及糖-脂代谢相关转录因子FAS，ACC，HSL，ATGL，GLUT1和GLUT4的mRNA表达变化。 结果：转染pIRES2-EGFP-TSLC1重组质粒的肝脏和脂肪细胞内TSLC1基因表达均显著升高(P<0.05)。在TSLC1基因过表达的小鼠肝细胞中，FAS(P<0.01)和ACC(P<0.05)表达降低，ATGL表达增加(P<0.05)；而TSLC1过表达对肝细胞内HSL、GLUT1和GLUT4的表达无显著影响。在TSLC1基因过表达的脂肪细胞中，ATGL表达增加(P<0.05)，但FAS、ACC、HSL、GLUT1和GLUT4的表达均无显著改变。 结论：成功构建小鼠TSLC1基因过表达载体。TSLC1过表达在肝细胞和脂肪细胞中可能主要通过调节ATGL表达从而影响脂质分解。在肝细胞内，TSLC1过表达还可能通过影响FAS、ACC表达从而调控肝细胞内脂质合成和脂肪酸β氧化，最终减少细胞内脂质蓄积。 第三部分人类新基因EOLA1核心启动子的初步鉴定 目的：查找人类新基因内皮高表达脂多糖相关因子-1（Endothelial-overexpressedlipopolysaccharide-associatedfactor1，EOLA1）核心启动子的位置，为确定其转录起始位点，进一步研究其功能及转录调控提供基础。 方法：针对人类EOLA1基因5’-端上游可能包含启动子序列的不同区域，采用PCR技术分别扩增4条缺失片段，分别将上述片段克隆至双荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic，以构建pGL3-Basic-F1，F2，F3，F4重组载体，并使用双酶切及DNA测序法对重组载体进行鉴定，将鉴定克隆正确的重组载体分别转染人脐静脉血管内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）。运用双荧光素酶报告基因检测系统验证各片段的萤火虫荧光素酶活性（M1）和海肾荧光素酶（M2）活性比值。 结果：克隆出4条目的片段，并克隆至pGL3-Basic载体后，经DNA测序验证，重组载体构建成功。重组载体转染HUVEC细胞后，测得M1/M2值结果显示pGL3-Basic-F1、F3和F4组均高于对照组（P<0.05），其中pGL3-Basic-F3组最高。 结论：成功构建重组荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-F1、F2、F3和F4。双荧光素酶活性检测提示EOLA1基因5’-侧翼区可能存在多个启动子，其核心启动子位于-657bp～-372bp区域内的可能性较大。
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