摘要
鱼类的早期发育，同其它卵生动物一样，是分解利用卵黄中的营养物质，形成新生命的组织、器官的过程。卵黄物质主要由蛋白质、脂质和碳水化合物组成。脂质作为卵黄物质的主要营养成分之一，一方面，脂质可为鱼类早期发育提供能量和必需脂肪酸，另一方面，脂质也是生物膜等组织的组成部分。本研究在本实验室已对普安银鲫（Carassius auratus gibelio）胚胎发育、仔稚鱼生长特性和胚胎期脂质营养等的研究基础上，采用酶学方法和荧光定量PCR方法对普安银鲫早期发育过程中脂质代谢关键酶活性变化及其mRNA表达量进行了研究，并探究葡萄糖和维生素C分别对普安银鲫早期发育、脂质代谢关键酶活性和mRNA表达量的影响。同时采用组织学方法研究了早期发育过程中消化系统组织学的变化特点，并探讨了消化系统的发育与脂质代谢酶活性与mRNA表达量之间的关系，旨在为鱼类的早期发育过程中脂肪代谢规律提供参考资料。主要研究结果如下： 1、在（24±0.5）℃水温条件下，通过设置不同浓度的葡萄糖溶液和维生素C溶液分别添加到普安银鲫的孵化水体中，直至卵黄囊完全消失。葡萄糖浓度为0、5、10、15和20 g/L；维生素C浓度为0、20、25、30和35 mg/L，记录孵化时间、孵化率及仔鱼成活率，结果显示： ①葡萄糖溶液浓度低于15 g/L，仔鱼出膜时间随着葡萄糖浓度的增加而缩短，孵化率、成活率、体质量和全长则升高；葡萄糖溶液浓度高于15 g/L对普安银鲫的早期发育表现出抑制作用。 ②维生素C溶液浓度低于30 mg/L时，仔鱼出膜时间随着维生素C浓度的增加而降低，孵化率、成活率、体质量和全长则升高。维生素C的浓度高于30 mg/L对普安银鲫的早期发育表现出抑制作用。 ③15 g/L葡萄糖溶液、30 mg/L维生素C溶液能促进普安银鲫的早期发育。 2、采用酶学方法研究了普安银鲫早期发育中乙酰辅酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase，ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase， LPL)、肝脂酶(hepatic lipase， HL)和肉毒碱棕榈酰转移酶I（carnitine palmitoyltransferases I，CPTⅠ）活性变化特点及15 g/L葡萄糖和30 mg/L维生素C分别对这5种酶活性的影响。结果显示： ①在成熟卵中已具有FAS、ACC、LPL、HL和CPTⅠ活性；早期发育中5种酶活性均比成熟卵中高，且5种酶活性在早期发育中总体呈上升趋势，在原肠期时酶活性出现一个显著升高点。 ②15 g/L葡萄糖溶液和30 mg/L维生素C溶液分别浸泡均对普安银鲫早期发育中FAS、ACC、LPL、HL和CPTⅠ的活性有促进作用。 3、采用荧光定量PCR技术检测ACCα、FAS、LPL和HL基因在普安银鲫早期发育中mRNA的表达水平，并检测了15 g/L葡萄糖和30 mg/L维生素C浸浴普安银鲫后对这四种基因mRNA表达量的影响。结果显示： ①ACCα、FAS、LPL和HL基因在成熟卵中已经开始表达，随早期发育的进行4种基因的表达量呈上升趋势，在原肠期mRNA表达量出现一个显著升高点。 ②15 g/L葡萄糖溶液和30 mg/L维生素C溶液分别浸泡均能诱导普安银鲫早期发育中ACCα、FAS、LPL和HL基因mRNA的表达。 4、利用形态学和组织切片的方法，对普安银鲫卵黄囊仔鱼发育过程中消化系统的组织学结构特征进行了描述，并探究了普安银鲫早期发育中ACCα、FAS、LPL和HL活性以及mRNA的表达与消化系统发生发育的关系。结果显示： ①随着鱼体的生长，仔鱼消化系统在结构和功能上不断完善成熟。1-2日龄为内源性营养阶段，卵黄囊较大。初孵仔鱼消化系统尚未发育完全，依靠吸收腹部卵黄囊内的卵黄来维持生命和器官发育，2日龄仔鱼消化道基本贯通，但未开始摄食。3-4日龄为混合营养阶段，卵黄囊逐渐被吸收，消化系统明显分化成食道、肠和肝脏等。5日龄以后仔鱼进入外源性营养阶段，仔鱼消化管加粗，肠内有食物残留。 ②ACC、FAS、LPL、HL和CPTⅠ的活性变化与早期发育中消化系统的发育正相关。 ③ACCα、FAS、LPL和HL四种基因表达量的变化趋势与其对应酶的酶活性变化趋势趋于一致，说明基因表达量的变化趋势在一定程度上可能衡量普安银鲫早期发育中消化系统的发育情况。
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