摘要
目的：探讨转染克老素（klotho,KL）基因对成骨细胞（osteoblast）活性的影响，揭示KL经FGF23（成纤维生长因子23）信号通路对骨代谢调节的分子机制。 方法：提取原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)并培养，用倒置显微镜观察BMSCs形态。BMSCs培养至第三代时做流式鉴定，之后换为诱导培养基培养14-21天，诱导为成骨细胞，用茜素红染色鉴定是否诱导成功。通过rAAV（重组腺相关病毒载体）介导小鼠Klotho基因转染成骨细胞。实验分为五组：空白对照组（control组），klotho转染组（KL组），klotho转染+FGFR1抑制剂(BGJ398)组（KL+BGJ398组），空载体组（rAAV组），空载体+FGFR1抑制剂(BGJ398)组（rAAV+BGJ398组）。分组处理72小时后，荧光倒置显微镜观察成骨细胞腺病毒表达情况， RT-PCR检测成骨细胞的KL mRNA的表达，ELISA检测上清液KL蛋白的含量；RT-PCR检测成骨细胞分泌物：骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的mRNA表达。 结果：成功提取原代骨髓间充质干细胞，并且成功向成骨方向诱导。通过rAAV转染KL后，成骨细胞高表达外源性KL蛋白（p＜0.01），并在KL-FGF23-FGFR1通路正常的情况下可显著促进成骨细胞分泌OCN(p＜0.05)，显著抑制成骨细胞分泌OPN(p＜0.05)。 结论:KL可以促进成骨细胞的活力，可能是通过 KL-FGF23-FGFR1通路发挥作用。
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