摘要
实验目的： 探讨 MAPKs(丝裂原活化蛋白激酶)在钛颗粒诱导的破骨细胞形成中的作用，并通过腺病毒介导的siRNA干扰p38的表达,观察sip38对钛颗粒诱导的破骨细胞形成和骨溶解的影响及可能机制。 实验方法： 1.体外实验中，采用钛颗粒悬液(0.1mg/ml)刺激原代破骨细胞前体细胞，通过TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)染色、Western Blot观察钛颗粒对破骨细胞成熟分化及相关蛋白TRAP的影响，并通过Western Blot检测MAPKs(p38 MAPK,ERK,JNK)信号通路的激活情况。 2.通过Western Blot、免疫荧光等检测经腺病毒介导的sip38干扰后各组破骨细胞相关蛋白 TRAP的表达，以及抗酒石酸酸性磷酸酶染色鉴定成熟破骨细胞，并通过PCR检测干扰p38后相关基因NFATc1、c-fos的变化. 3.体内实验中，构建小鼠颅骨颗粒诱导骨溶解模型，通过H&E染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色及免疫组化等，观察不同处理组颅骨骨溶解及破骨细胞数目变化情况。 实验结果： 1.钛颗粒可通过激活p38 MAPK、JNK信号通路促进破骨细胞的分化成熟，并且p38 MAPK的激活更加明显。 2.通过体外诱导培养破骨细胞并干扰p38的表达及磷酸化，观察到sip38可通过降低c-fos、NFATc1基因的表达，从而抑制钛颗粒诱导的破骨细胞分化成熟和特异性TRAP蛋白的表达。 3.成功建立钛颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解模型，通过 siRNA干扰p38的表达及激活后，破骨细胞数目及颗粒诱导的颅骨骨溶解明显减少。 实验结论： 本课题证明钛颗粒可通过p38 MAPK信号通路促进破骨细胞的分化成熟，通过腺病毒介导的小干扰RNA沉默p38可抑制p38 MAPK信号通路的激活，从而降低调控破骨细胞分化成熟的相关基因 NFATc1及 c-fos的表达，抑制磨损颗粒诱导的破骨细胞前体细胞的成熟分化。局部注射sip38可有效减少钛颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解。
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