摘要
目的：探讨黄芪甲苷对镉致TM3细胞凋亡及缝隙连接蛋白43表达和缝隙连接细胞间通讯功能影响的保护作用。 方法：MTT细胞活性实验筛选黄芪甲苷拮抗镉的最佳保护浓度；流式细胞术作TM3细胞凋亡分析；透射电镜用作观察TM3细胞超微结构；免疫组织化学（SP法）、Weastern blot方法检测缝隙连接蛋白43表达；实时荧光定量PCR技术检测缝隙连接蛋白43 mRNA表达；划痕标记染料示踪技术（SLDT）检测缝隙连接细胞间通讯功能。 结果：24h、48h MTT实验：对照组与不同浓度黄芪甲苷组 TM3细胞成活率差异均无统计学意义；镉组 TM3细胞成活率明显降低，且随镉浓度增加降低越明显；镉加黄芪甲苷组 TM3细胞成活率明显高于相应镉组，黄芪甲苷的最佳保护浓度为20㎎/L。流式细胞术分析：对照组与黄芪甲苷组24h细胞凋亡率差异无统计学意义；镉组随镉浓度增加凋亡率逐渐增加；镉加黄芪甲苷组凋亡率均低于相应镉组（P＜0.01）。透射电镜观察：镉处理后 TM3细胞超微结构破坏明显；镉加黄芪甲苷组超微结构破坏较相应镉组为轻。免疫组织化学（SP法）：与对照组相比，镉处理后 TM3细胞缝隙连接蛋白43阳性产物表达的平均光密度值明显降低（P＜0.01），平均灰度值明显升高（P＜0.01）；镉加黄芪甲苷组缝隙连接蛋白43阳性产物平均光密度值表达虽较对照组降低，但显著高于相应镉组（P＜0.01），而平均灰度值表达虽较对照组增加，但显著低于相应镉组（P＜0.01）。Weastern blot、实时荧光定量PCR及划痕标记染料示踪技术：与对照组相比，黄芪甲苷组TM3细胞缝隙连接蛋白43及 mRNA表达均无明显差异，TM3细胞缝隙连接细胞间通讯功能无明显改变；镉组TM3细胞缝隙连接蛋白43和 mRNA表达均下降（P＜0.01），而TM3细胞缝隙连接细胞间通讯功能减弱；镉加黄芪甲苷组 TM3细胞缝隙连接蛋白43及 mRNA表达虽较对照组降低，但明显高于镉组（P＜0.01），缝隙连接细胞间通讯功能则无明显减弱。 结论：黄芪甲苷对镉致 TM3细胞凋亡增加、缝隙连接蛋白43及mRNA表达下降以及缝隙连接细胞间通讯功能减弱有较明显的拮抗作用。
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