摘要
近年来，人们致力于寻求抑制肿瘤发生和转移侵袭的新天然药物，皂苷类化合物在植物界分布广泛，并且具有良好的抗肿瘤作用，不但能抑制癌细胞增殖，还能增强免疫力、抑制肿瘤细胞转移等。绞股蓝属于药食同源性植物，从中提取分离得到的皂苷是其主要的活性成分，目前对绞股蓝总皂苷的抗肿瘤作用研究的较多，而对于单体绞股蓝皂苷的抗肿瘤作用研究的相对较少，分子机制尚不清楚。本课题采用不同实验方法对绞股蓝皂苷中的三种单体化合物N-2、J-0-1、J-D-40的诱导癌细胞凋亡、抑制转移侵袭机制进行了研究。 本实验以人肝癌HepG2细胞为实验模型，通过MTT法检测样品对HepG2细胞的抑制作用;电子扫描电镜观察细胞形态;DAPI染色观察细胞核形态变化;流式细胞术检测细胞周期变化，以及AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞术法分析检测细胞凋亡;Rh-123染色分析检测细胞线粒体跨膜电位的变化;用划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞的转移、侵袭能力;RT-PCR检测p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α的mRNA表达;Western-blotting检测p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α蛋白表达。 实验结果表明，绞股蓝皂苷N-2、J-0-1、J-D-40具有诱导细胞凋亡、抑制转移侵袭的能力。样品抑制HepG2细胞的增殖，且抑制作用呈浓度依赖性;人参皂苷Rg3200μmol/L,绞股蓝皂苷N-2200μmol/L、J-0-1100μmol/L、J-D-4050μmol/L作用于HepG2细胞后，细胞凋亡现象明显，凋亡细胞数增加，线粒体跨膜电位降低，细胞粘附性降低，细胞迁移速率减弱，穿膜细胞数减少，p53、MMP-2、MMP-9 mRNA表达降低，p53、MMP-2、MMP-9蛋白水平表达明显降低;HIF-1α基因与缺氧对照组相比，mRNA的表达明显降低，蛋白水平表达也明显降低。因此绞股蓝皂苷N-2、J-0-1、J-D-40可以下调肝癌HepG2细胞中p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α的表达，来达到抑制肝癌细胞增殖、转移侵袭的目的。
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