摘要
由寄生虫引起的疾病是全球感染性疾病的一个重要组成部分。许多种肠道寄生性原虫能引起人和动物的腹泻，甚至引发更严重的疾病，尤其是在免疫功能缺陷的群体中。毕氏肠微孢子虫（Enterocytozoon bieneusi）、十二指肠贾第虫（Giardia duodenalis）和隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）是能够感染人和多种哺乳动物的重要的人兽共患肠道原虫。它们的临床显著性主要体现在人和幼龄动物，尤其会使儿童和老人等免疫力低下群体产生生长缓慢和营养失调等慢性感染症状。如今，这三种肠道原虫在人和动物之间的传播特点也成为了研究的热点。目前，有关这三种肠道原虫在绵羊中的流行情况、传播特点、基因型分布及宿主特异性等方面的研究较少。本研究对黑龙江部分地区绵羊中携带的三种肠道原虫进行了基因型和亚型分型的研究，并评估其人兽共患可能性及重要性。 本试验针对毕氏肠微孢子虫核糖体内部转录间隔区(ITS)进行PCR扩增和测序分析，在489份绵羊粪便样本中共鉴定出68个阳性，阳性率为13.9％。基于ITS位点序列多态性分析鉴定出5个已知基因型BEB6、CM7、CS-4、EbpC、OEB1和6个新基因型NESH1-NESH6。这些基因型在系统进化分析中形成两个遗传组，其中基因型CS-4、EbpC和NESH1-NESH3分布在人兽共患遗传组1中，而基因型BEB6、CM7、OEB1和NESH4-NESH6则分布在具有宿主特异性的遗传组2中。大约70％的绵羊毕氏肠微孢子虫病例是由对人有致病力的基因型BEB6、CS-4和EbpC所致。其中基因型CS-4和EbpC在中国东北地区的儿童和反刍动物中同时被检出，同样在中国中部地区的人和水源中同时发现了基因型BEB6和EbpC，表明这些基因型具有人兽共患潜力。该研究还总结了反刍动物毕氏肠微孢子虫在世界范围内的基因型分布、宿主范围和遗传进化关系。数据分析表明分布于遗传组2中的一些曾被认为是具有反刍动物特异性的基因型（如BEB4、BEB6、I和J）出现了明显的宿主范围扩增现象。因此，应当重视遗传组2中具有低宿主特异性的基因型和其可能导致的人兽共患微孢子虫(microsporidiosis)病。 本研究应用Feng等建立完善的多位点序列分型(MLST)方法对哈尔滨、大庆和齐齐哈尔的34份ITS阳性样本进行多位点分型的研究。这34个阳性样本的ITS基因型为BEB6、CS-4和NESH1-NESH3。系统进化分析显示基因型BEB6具有宿主特异性(host-adapted)，而基因型CS-4和NESH1-NESH3具有人兽共患潜力(zoonoticpotential)。MLST的巢式PCR扩增结果显示:在MS1位点得到6个阳性，产生6个基因型;MS7位点得到3个阳性，得到2个基因型;其它位点并未扩增出阳性。系统进化分析显示具有宿主特异性的BEB6分离株在MS1和MS7位点上与人分离株亲缘关系相近，这与在ITS位点上得到的系统进化分析结果不一致。这一结果进一步证实了遗传组2中的曾被认为具有宿主特异性的基因型BEB6具有人兽共患潜力。 本研究通过巢式PCR对十二指肠贾第虫磷酸丙糖异构酶基因(TPI)、谷氨酸脱氢酶基因(GDH)和β-贾第素基因(BG)三个基因位点进行扩增。基于TPI位点的巢式PCR扩增检测到11个阳性，感染率为2.2％，基于BG位点，检测到5个阳性，感染率为1.0％。而基于GDH位点并未检测到阳性。共鉴定出2个类群，包括人兽共患类群A和反刍兽特异的类群E。 针对小亚基核糖体RNA（SSU rRNA）基因内部多态区进行巢式PCR扩增，对从黑龙江省三个地区采集到的489份绵羊粪便样本进行隐孢子虫感染率及虫种的鉴定，共检测到2个阳性，感染率为0.4％。经鉴定得到的隐孢子虫种为C.xiaoi。 综上所述，绵羊可能是人微孢子虫病和贾第虫病(giardiasis)的贮存宿主或潜在感染源。本研究为人和动物微孢子虫病和贾第虫病的预防和控制提供基础依据。
NETL