摘要
子痫前期是妊娠特有疾病—妊娠期高血压疾病的一种，它的临床发病特点主要表现为妊娠20周后新发的高血压（BP≥140/90mmHg）、蛋白尿(尿蛋白≥0.3g/24h或随机尿蛋白+)。目前，子痫前期被普遍认为是引起孕产妇和围生儿发病和死亡的主要原因之一。子痫前期在世界范围内的发病率为2%-8%，全世界每年超过50，000名孕产妇因此而死亡，其在中国的发病率高达9.4%，但其发病机制目前尚未得到完全阐明。 子痫前期被认为是多种因素(神经、激素、胎盘、遗传、环境、免疫因素等)综合作用的结果。目前比较公认的是子痫前期发病机制的“两阶段”学说。第一阶段，胎盘灌注状态的改变导致妊娠早期发生一系列潜在的病理性改变：子宫螺旋动脉中的滋养细胞发生重铸障碍，胎盘的血流灌注减少，从而导致胎盘的缺血、缺氧和多种胎盘因子的释放；第二阶段，妊娠中、晚期孕产妇多个器官受累，临床症状出现：多种胎盘因子经胎盘进入母体血液循环，激活母体的系统性炎症反应并造成血管内皮的损伤，从而导致母体出现子痫前期以及子痫的各种临床症状。由于子痫前期随着胎盘的形成而出现，胎盘的娩出而好转或消失，因此认为其发生可能与胎盘的功能异常密切相关。研究表明，氧化应激及其造成的血管内皮损伤在子痫前期的发生发展过程中发挥着重要作用。Nrf2-ARE通路是调节细胞内众多抗氧化物表达的关键因子，具有抗氧化、抗炎、抑制凋亡等多种生物学活性。NQO1是Nrf2-ARE通路下游的一个调控基因，其表达水平的改变与多种癌症（如宫颈癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌等）相关。NQO1在癌组织中的表达水平上调，能够保护细胞免受氧化损伤，从而促进细胞的增殖，导致癌症的发生和发展，但在子痫前期中尚未见报道。本研究通过检测 Nrf2和NQO1在重度子痫前期患者和正常妊娠产妇胎盘组织中的表达情况，从而对胎盘组织中Nrf2和NQO1在子痫前期发病过程中的作用进行初步的探讨。 目的:本研究的目的在于通过检测重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中Nrf2和NQO1 mRNA和蛋白的水平，并定位二者在胎盘组织中的位置，从而对胎盘组织中Nrf2和NQO1的表达与子痫前期发病的关系进行初步的探讨。 材料和方法: 1.研究对象:研究对象包括病例组和对照组，其中病例组是2014年1月－2015年3月在郑州大学第三附属医院产科确诊并且行剖宫产的30例重度子痫前期（sPE）患者，对照组是随机选取的30例同期择期行剖宫产手术的正常孕产妇，重度子痫前期的诊断标准参照人民卫生出版社出版的第8版《妇产科学》。所有的孕产妇均为单活胎，且排除伴有胎膜早破、胎盘早剥、前置胎盘、高血压疾病、肾病、糖尿病、多囊卵巢综合症及其他妊娠合并症的孕产妇。本研究经过本院伦理委员会批准并获得所有研究对象的知情同意。 2.方法:胎盘娩出后15min内，于胎盘母体面的中心位置及3、6、9、12点方向分别取一块胎盘全层组织，每块大小约2cm×2cm×1cm，注意避开胎盘边缘、出血、坏死及钙化处，用无菌滤纸反复吸取所取组织上的血液。迅速将一部分所取的胎盘组织用无菌冻存管分装后立即置于液氮罐内，然后放入-80℃冰箱中冻存备用；剩余的胎盘组织用生理盐水清洗组织上的残存血液后放入体积分数10%的甲醛溶液中固定备用。应用Real-Time PCR方法比较重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中Nrf2和NQO1 mRNA的表达水平；免疫组织化学方法检测两组产妇胎盘组织中Nrf2和NQO1蛋白的定位和表达。采用2-△△CT法分析重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中Nrf2和NQO1 mRNA的相对表达量。在进行免疫组织化学实验时，用PBS代替一抗作为实验的阴性对照；胎盘组织的阳性染色须满足：镜下观，细胞的结构清晰，细胞质或细胞核内出现明显高于背景的棕黄色或棕褐色着色。采用半定量积分的方法进行两组产妇胎盘组织中Nrf2和NQO1蛋白表达情况的分析。 3.统计学处理:采用SPSS21.0软件进行统计学分析。定量资料用Xs表示，进行两组间的比较时，两组数据均符合正态分布的资料采用两独立样本的t检验，不符合正态分布的资料采用非参数秩和检验。定性资料用率表示，两组间比较采用四格表?2检验；两组有序多分类资料采用秩和检验（Mann-Whitney U检验）。以α=0.05为检验水准。 结果: 1.重度子痫前期组和正常对照组产妇一般临床资料的比较:重度子痫前期组（sPE组）和正常对照组（N组）产妇的平均年龄分别为28.87±4.94岁、29.97±3.89岁，孕时BMI分别为29.89±3.12 kg/m2、28.48±3.05 kg/m2，分娩时孕周分别为35.07±2.92w、38.23±1.28w，新生儿体重分别为2288.33±691.16g、3381.67±486.63g，收缩压分别为164.53±12.64 mmHg、116.67±9.41 mmHg，舒张压分别为108.43±9.73 mmHg、74.87±7.14 mmHg。经统计分析，重度子痫前期组和正常对照组产妇的平均年龄、孕时BMI的差异均无统计学意义；重度子痫前期组产妇的分娩时孕周、新生儿体重均低于正常对照组，且差异均具有统计学意义；重度子痫前期组产妇的收缩压、舒张压均高于正常对照组，且差异均具有统计学意义。此外，重度子痫前期组产妇的尿蛋白定性为“＋”、“＋＋”、“＋＋＋”的例数分别有5例、19例、6例，而正常对照组产妇的尿蛋白定性均为阴性，且两组间的差异具有统计学意义。 2.重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中Nrf2 mRNA的表达情况:与正常对照组相比，重度子痫前期组胎盘组织中Nrf2 mRNA的表达水平降低（重度子痫前期组和正常对照组Nrf2 mRNA的相对表达量分别为3.840±0.426，4.183±0.604），且两组间的差异具有统计学意义。 3.重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中 NQO1 mRNA的表达情况:与正常对照组相比，重度子痫前期组胎盘组织中NQO1 mRNA的表达水平降低（重度子痫前期组和正常对照组 NQO1 mRNA的相对表达量分别为4.608±0.776，5.358±0.811），且两组间的差异具有统计学意义。 4.重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中 Nrf2蛋白的定位与表达情况:Nrf2蛋白主要在胎盘滋养层细胞的细胞质中表达，细胞核少见表达。与正常对照组相比，重度子痫前期组胎盘组织中Nrf2蛋白的表达水平降低（重度子痫前期组和正常对照组的阳性表达率分别为46.7%和76.7%），且两组间的差异具有统计学意义。 5.重度子痫前期组和正常对照组产妇胎盘组织中NQO1蛋白的定位与表达情况:NQO1蛋白在胎盘滋养层细胞的细胞质中表达。与正常对照组相比，重度子痫前期组胎盘组织中 NQO1蛋白的表达水平降低（重度子痫前期组和正常组的阳性表达率分别为43.3%和70.0%），且差异具有统计学意义。 结论:重度子痫前期患者胎盘组织中Nrf2和NQO1的低表达可能通过减弱胎盘的抗氧化能力从而参与子痫前期的发病过程。
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