摘要
植物病毒病严重危害农业生产，在蔬菜和果树上尤为严重，可造成巨大的经济损失。病毒在侵染寄主植物后，造成植株代谢异常，果实减少或畸形，甚至绝收。本研究主要以蔬菜上的番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）及果树上的李属坏死环斑病毒（Prunus necrotic ringspot virus，PNRSV）和李树皮坏死茎纹孔伴随病毒（Plum bark necrosis stem pitting-associated virus，PBNSPaV）为研究对象，目的是优化ToCV RT-PCR检测方法，为日后检测该病毒提供参考依据；同时，摸清河南设施番茄主产区ToCV以及山东肥城桃主产区PNRSV和PBNSPaV的发生情况，了解系统发育关系。 通过对ToCV RT-PCR检测方法的优化表明：ToCV特异性引物To-CP（F/R）的灵敏度和特异性最好，该引物能在退火温度37~64℃、引物浓度4~10 pmol/μL的区间内检测到ToCV的特异性片段；引物To-HSP（F/R）可以一次性扩增HSP70基因的全长序列。优化后的RT-PCR扩增效果相对稳定；设计了同时扩增ToCV HSP70和CP基因的双重PCR体系，能有效缩短实验时间。 对河南省ToCV发病情况进行调查与检测，结果显示：河南番茄主产区采集的90份疑似感病番茄样品中，检出阳性样品39份，将得到的分离物序列（GenBank登录号KP264983/KP2649865、KP264984/KP9264987、KP264985/KP264988）用于序列一致性比较和系统发育分析。结果表明：本研究的分离物均与日本分离物的一致性最高，亲缘关系最近。同时提取ToCV病毒粒子，经负染色后，观察到ToCV完整的形态结构。 利用RT-PCR技术，对肥城桃主产区采集的158份桃树叶片样品，进行PNRSV和PBNSPaV的检测与鉴定，结果显示：PNRSV和PBNSPaV阳性样品的检出数量分别为9份和11份，将得到的分离物序列（GenBank登录号KU179193、KU204711）用于序列一致性比较和系统发育分析。结果表明：山东肥城桃PNRSV和PBNSPaV的分离物分别与智利和湖北武汉分离物一致性最高，亲缘关系最近。
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