摘要
本研究以火龙果（Hylocereusndatus）茎段组织为外植体进行离体培养研究，建立火龙果茎段组织再生体系，并利用此再生体系进行火龙果体细胞抗寒突变体的诱导与筛选，得到具有抗寒能力的火龙果植株。本实验着重研究了火龙果茎段外植体表面灭菌方法和不同生长调节物质对火龙果茎段愈伤组织的诱导和增殖、不定芽的分化以及生根的影响，同时利用火龙果茎段诱导出的愈伤组织在低温下处理，将存活的愈伤组织增殖、分化和生根移栽，获得具有抗寒特性的火龙果植株。主要研究结果如下: 1.火龙果茎段外植体的最佳表面灭菌方法 选取火龙果一年生幼嫩无病虫害枝条，切成2～4cm长放置于大烧杯中，在自来水流下冲洗2h。将冲洗好的火龙果茎段放在超净工作台上，先用75％的酒精浸泡并摇晃30s，无菌水冲洗4～6次，再用0.1％升汞溶液浸泡8min，最后用无菌水冲洗4～6次。此种方法灭菌效果最好，污染率低至9.2％。 2.火龙果茎段愈伤组织诱导的最适培养基 火龙果茎段愈伤组织诱导的最适培养基为:MS+6-BA2.0mg·L-1+TDZ0.8mg·L-1+NAA0.1mg·L-1。此时茎段愈伤组织出愈率达92.7％，愈伤组织块大，呈黄绿色致密细颗粒状。 3.火龙果茎段不定芽诱导的最适培养基 火龙果茎段不定芽诱导的最适培养基为:MS+TDZ0.4mg·L-1+KT0.5mg·L-1+IBA0.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。在此条件下不定芽再生率达到87.2％，且芽呈绿色，茎段粗壮，长势健壮。 4.火龙果茎段最适生根培养基 火龙果茎段最适生根培养基为:1/2MS+NAA0.4mg·L-1+IBA0.3mg·L-1+AC500mg·L-1，生根率达到97.3％，而且平均每株生根数为7.1条，平均根长达10.2cm，生根苗长势健壮。 5.炼苗移栽 当生根苗茎段高5～7cm，根3～5条时，将生根苗移栽至珍珠岩∶腐叶土∶蛭石=1∶2∶1混合基质中，放在自然环境中生长（冬天放置于温室大棚中生长），适当施肥，加强光照和水分管理，移栽成活率达97％。 6.火龙果体细胞抗寒突变体及火龙果抗寒植株的获得 将继代增殖15d的火龙果茎段愈伤组织分别在0、2、4℃的恒温气候箱中低温处理48h，最终0℃条件下存活3块愈伤组织，2℃条件下存活5块愈伤组织，4℃条件下存活10块愈伤组织。将这18块愈伤组织继续培养直至生根移栽，最后共得到55株火龙果植株。55株火龙果植株外部形态指标与正常生长的火龙果植株差异不明显。
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