摘要
本研究主要表达了来自青扦云杉，白扦云杉和红皮云杉的四种脱水素蛋白，并且分别将它们命名PicW1、PicW2、PicM、PicK。这四种蛋白质都是季节性表达的低温冷驯化蛋白并且包含5个重复的QKA起始的重复序列。序列分析结果表明四种蛋白质主要的差异为4个区域中7个氨基酸残基的变化。我们通过微量蒸汽扩散法筛选晶体生长条件，使用DSC检测了四种蛋白质的热稳定性。结果显示:1.四种蛋白质筛选出了结晶条件，PicW2和PicK在INDEX1-44(0.1M HEPES pH7.5，25％w/vPEG3350)条件下长出晶体，PicM在INDEX1-22(0.8 M Succinic Acid pH7.0)条件下长出晶体，PicW1在SCREEN2(0.1M Sodium chloride，0.1M BICINE pH9.0，20％ v/vPolyethlene glycol monomethyl ether550)条件下长出晶体。2.四种蛋白质的热稳定性也十分优异，其中PicM是最稳定的蛋白质，变性温度为187.08℃，依次为PicW2的178.79℃，PicK的163.09℃，和PicW1的139.61℃。四种蛋白质的热容值是PicW2为24.90 J·K-1·g-1, PicW1为16.63 J·K-1·g-1, PicM为14.35 J·K-1·g-1, PicK为2.39J·K-1·g-1。3.使用I-TASSER蛋白质分子模拟软件模拟出四种蛋白质的三级结构，发现蛋白质主要有螺旋结构和无规则卷曲构成，并且5个K片段都形成了螺旋结构。第13位氨基酸的突变使得PicW1与其他三种蛋白质有了显著地结构差异。第160位到163位氨基酸的组成使得PicM与PicW2和PicK在该区域有了显著差异。结合DSC检测结果发现第160位到163位氨基酸的变化能够显著地影响蛋白质的热稳定性和热容，第13位的氨基酸变化对蛋白质热稳定性和热容的影响较小。
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