摘要
近年来，为了有效的利用植物资源，避免对资源的盲目开采和过度开发，国内外围绕着药用植物内生真菌展开了大量研究。内生真菌在与药用植物伴生或者共生的阶段内，因其丰富的生物多样性，会与药用植物互相产生不同程度的影响，但不会对药用植物产生明显的病害。植物内生真菌是一大类未被系统研究过的新的微生物资源，具有潜在的应用前景。目前研究表明，药用植物内生真菌的次生代谢产物中有较多药效活性成分，有的与宿主植物相同或相似，有的与宿主截然不同。本课题以分离自天然药用植物防风叶片部分的活性菌株为研究对象，对其次生代谢产物的化学成分进行了研究，期望从中得到具有较好生物活性的化合物。 本课题从采自秦岭地区的防风植物中分离得到32株活性内生真菌，选取一株抑菌活性较强的菌株DL02为研究对象，采用形态学特征和ITS序列鉴定，确定DL02为裂褶菌（Schizophyllum commune Franch.）。利用大米固体培养基，对菌株DL02进行大量发酵，发酵物风干粉碎后，经乙酸乙酯，甲醇提取后，利用硅胶柱层析，重结晶和Sephadex LH-20柱层析等方法对提取的浸膏进行分离和纯化，并结合所得化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构。从菌株DL02的次生代谢产物中分离得到14个化合物:烟酸(1)，丁二酸(2)，麦角甾醇(3)，22E-5α，8α-桥二氧麦角甾-6，22-二烯-3β-醇(4)，色胺酮(5)，Lawsaritol A(6)，胡萝卜苷(7)，赤藓醇(8)，kojic acid(9)，β-谷甾醇(10)，尿嘧啶(11)，尿囊素(12)，豆甾-7，22-二烯-3β,5α，6α-三醇(13)，腺嘌呤核苷(14)。其中化合物6，9，11，12，13，14均为首次从裂褶菌发酵产物中分离得到。 抑菌活性测试中，以4株细菌（绿脓杆菌，大肠杆菌，乳链球菌，金黄色葡萄球菌）和10株植物病原真菌（苹果树腐烂病菌，葡萄炭疽病菌，油菜菌核病菌，玉米大斑病菌，白菜黑斑病菌，番茄灰霉病菌，辣椒疫霉病菌，芍药炭疽病菌，小麦赤霉病菌，烟草赤星病菌）作为测试菌，通过二倍稀释法得到14个化合物的最小抑菌浓度(MIC)值，对其抑菌活性强度进行评价，结果表明化合物5（色胺酮）对植物病原真菌和细菌均有较强的抑菌活性，其中对大肠杆菌的MIC值为3.9μg/mL，对苹果树腐烂病菌的MIC值为15.6μg/mL。化合物1（烟酸）、2（丁二酸）、8（赤藓醇）、9(kojic acid)对于细菌和真菌均有不同程度的抑制活性，但是抑制强度较弱。化合物3（麦角甾醇）、4（22E-5α，8α-桥二氧麦角甾-6，22-二烯-3β-醇）、6(Lawsaritol A)、7（胡萝卜苷）、10（β-谷甾醇）、11（尿嘧啶）、13（豆甾-7，22-二烯-3β,5α,6α-三醇）对于真菌和细菌抑制活性较弱。 在对14个化合物的抗氧化活性实验中，将结果与维生素C的抗氧化活性进行比较，并未发现有较强抗氧化活性的化合物，化合物9(kojic acid)、化合物11（尿嘧啶）、化合物12（尿囊素）、化合物14（腺嘌呤核苷）有较弱的抗氧化活性，其余化合物均未表现出明显抗氧化活性。 综上，本课题对防风内生真菌DL02次生代谢产物进行了研究，共分离得到14个单体化合物。结合抑菌活性测试和抗氧化活性测试结果，发现了具有较强广谱抗菌活性的化合物5（色胺酮），其对细菌和植物病原真菌的抑制作用均很强。化合物1（烟酸）、2（丁二酸）、8（赤藓醇）、9(kojicacid)也具有一定的抑细菌和植物病原真菌的活性，因此菌株DL02作为抗菌药物的来源，可进一步研究。菌株DL02也可作为一种生物抑菌工具，保护宿主植物不受细菌和植物病原真菌的侵染。本课题丰富了防风内生真菌的研究，对于裂褶菌的开发利用有重要意义，也说明了内生真菌在药物发展中的重要角色。
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