摘要
目的： 本研究初步探讨免疫细胞表达的 CD39/CD73/A2AR信号途径在过敏性哮喘中的表达特征及其与过敏性哮喘外周血中 Treg/Th17失衡的相关性。初步明确CD39/CD73/A2AR信号途径在过敏性哮喘中的作用机制，进一步阐明过敏性哮喘的免疫学发病机制，为寻求哮喘的免疫学治疗提供新思路。 方法： 荧光实时定量PCR技术检测PBMCs（外周血单个核细胞）表达CD39、CD73和A2AR mRNA情况；酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血浆中细胞因子IgE、IL-4、IL-17A和TGF-β浓度；流式细胞术分析外周血IL-17+Foxp3+CD4+T辅助细胞、Th17细胞、CD4+T细胞和调节性T细胞（Treg细胞）表达的CD39和CD73蛋白水平。 结果： 1.哮喘组PBMCs表达的CD39 mRNA明显低于对照组（（1.49±0.59）×10-3 vs（2.17±0.77）×10-3，P＜0.01）；而CD73 mRNA在两组间无明显差异（（1.17±0.50）×10-3 vs（1.03±0.39）×10-3，P＞0.05）；哮喘组 A2AR mRNA明显高于对照组（（0.45±0.29）×10-3 vs（0.21±0.06）×10-3，P＜0.05）。 2.哮喘组PBMCs表达的CD39 mRNA水平与血浆IL-4、IL-17A水平呈显著负相关性（r=-0.468，P＜0.05；r=-0.550，P＜0.05），与血浆TGF-β水平呈显著正相关性（r=0.425，P＜0.05）；CD73 mRNA水平与IL-4、IL-17A、TGF-β水平均无显著相关性；A2AR mRNA水平与血浆IL-4水平呈显著正相关性（r=0.583，P＜0.01），与TGF-β水平呈显著负相关性（r=-0.499，P＜0.01），而与IL-17A有无相关性（r=0.395，P=0.085）。 3. CD39+CD4+T细胞占总 CD4+T的相对百分率正常对照组明显高于哮喘组（（10.77±3.94）%vs（4.07±3.21）%，P<0.001）。将哮喘组分为间歇轻度组和中重度组后发现 CD39+CD4+T细胞占总 CD4+T的相对百分率正常对照组明显高于间歇轻度组（（10.77±3.94）%vs（3.84±2.58）%，P<0.001）和中重度组（（10.77±3.94）%vs（4.43±4.13）%，P<0.001），但哮喘亚组间无明显差异（P＞0.05）。CD73+CD4+T细胞占总 CD4+T的相对百分率正常对照组与哮喘组无显著统计学差异（（8.44±5.48）%vs（7.12±4.90）%，P＞0.05）；分组后发现CD73+CD4+T细胞占总CD4+T的相对百分率间歇轻度组为（7.47±6.06）%，中重度组为（6.58±2.29）%，但在三组之间无明显差异（P＞0.05）。 4.研究结果提示正常对照组CD39+Treg细胞占总Treg细胞的相对百分率明显高于哮喘组（85.18（79.04–88.12）%vs（30.95（20.16–58.10）%，P<0.001）。将哮喘组分为间歇轻度组和中重度组后发现 CD39+Treg细胞占总 Treg细胞的相对百分率在正常对照组明显高于间歇轻度组（85.18（79.04–88.12）% vs29.41（19.80–52.98）%，P<0.001）和中重度组（85.18（79.04–88.12）%vs36.02（27.47–66.91）%，P<0.001），哮喘亚组间无明显差异（P＞0.05）。CD73+Treg细胞占总Treg细胞的相对百分率存在类似变化趋势，正常对照组明显高于哮喘组（34.7（26.30–54.23）%vs8.31（5.40–12.60）%，P<0.001）。分组以后发现正常对照组明显高于间歇轻度组（34.78（26.30–54.23）%vs6.46（4.98–11.71）%，P<0.001）和中重度组（34.78（26.30–54.23）%vs10.50（7.69–13.98）%，P<0.001），且哮喘亚组间无明显差异（P＞0.05）。 5.正常对照组 IL-17+Foxp3+CD4+T细胞占总 Treg细胞的相对百分率为4.69（2.90–8.01）%，间歇轻度组和中重度组分别为6.10（4.63–8.70）%和16.80（9.13–32.65）%。进行比较后发现，中重度组明显高于正常对照组和间歇轻度组（P<0.01），而正常对照组与间歇轻度组间无明显差异（P＞0.05）。哮喘组IL-17+Foxp3+CD4+T细胞占总Treg细胞的相对百分率与FEV1(%pred)呈显著负相关性（r=-0.422，P<0.05），与ACQ7评分无显著相关性（r=0.416，P=0.139）。正常对照组Th17细胞占CD4+T细胞相对百分率为0.52（0.35–0.82）%，间歇轻度组和中重度组分别为1.60（0.73–2.03）%和1.98（1.28–4.89）%。进行比较后发现，中重度组明显高于正常对照组和间歇轻度组（P<0.01），而正常对照组与间歇轻度组间无明显差异（P＞0.05）。 6.哮喘组外周血CD39+CD4+T细胞和CD73+CD4+T细胞占总CD4+T细胞相对百分率与外周血Th17细胞占总CD4+T细胞相对百分率呈显著负相关性（r=-0.348,P<0.05;r=-0.428，P<0.05），而与外周血IL-17+Foxp3+CD4+T细胞占总Treg细胞的相对百分率无显著相关性。哮喘组CD39+Treg细胞和CD73+Treg细胞占总Treg细胞的相对百分率与哮喘组外周血Th17细胞占总CD4+T细胞相对百分率存在显著负相关性（r=-0.377，P<0.05;r=-0.428，P<0.05），而与哮喘组外周血IL-17+Foxp3+CD4+T细胞占总Treg细胞的相对百分率无显著相关性。 结论： 1.与正常对照组比较，哮喘组PBMCs表达的CD39 mRNA明显下降，CD73 mRNA无明显变化，A2AR mRNA水平明显升高，提示CD39/CD73/A2AR可能参与过敏性哮喘疾病的免疫学发病机制，且CD39和A2AR起着更为重要的作用。哮喘组PBMCs表达的CD39 mRNA水平与IL-4和IL-17A水平呈显著负相关性，与TGF-β水平呈显著正相关性；A2AR mRNA水平与IL-4水平呈显著正相关性，与TGF-β水平呈显著负相关性，而与IL-17A有无相关性，提示在过敏性哮喘疾病中CD39/CD73/A2AR信号途径可能参与了IL-4和IL-17A水平的上调和TGF-β水平的下调，从而参与了过敏性哮喘疾病的发生，也间接提示了CD39/CD73可能参与调节过敏性哮喘Treg/Th17的失衡。 2.与正常对照组比较，哮喘组CD4+T细胞表达的CD39和Treg细胞表达的CD39和CD73水平明显低于对照组，尽管CD4+T细胞表达的CD73在两组间无显著差异，在总的趋势上提示CD4+T细胞和Treg细胞表达的CD39/CD73可能参与过敏性哮喘疾病的免疫学发病机制。 3.过敏性哮喘疾病中伴随表型IL-17+Foxp3+CD4+T辅助细胞数量增多现象，提示IL-17+Foxp3+CD4+T辅助细胞在过敏性哮喘疾病免疫学发病过程起着重要作用。 4.哮喘组外周血CD39+CD4+T细胞和CD73+CD4+T细胞占总CD4+T细胞相对百分率和 CD39+Treg细胞和 CD73+Treg细胞占总 Treg细胞相对百分率与外周血Th17细胞占总 CD4+T细胞相对百分率呈显著负相关性，而与外周血IL-17+Foxp3+CD4+T细胞占总Treg细胞百分率无显著相关性，提示在过敏性哮喘疾病中CD4+T细胞和Treg细胞表达的CD39和CD73可能主要通过调控Th17细胞的水平参与调控Treg/Th17失衡，而非通过调控IL-17+Foxp3+CD4+T细胞水平。
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