摘要
凝集素是可以特异性结合糖类的模式识别受体，在先天性免疫中发挥着重要作用。本研究从已构建的大黄鱼（Larimichthys crocea）转录组数据库中筛选出两种凝集素基因， galectin-9和Nattectin-like新型C-型凝集素，分别命名为LcGal-9和LcNTC，并对它们的免疫功能进行了研究，得到的结果如下： LcGal-9是一种半乳糖凝集素，其cDNA全长1496 bp，开放阅读框（ORF）978 bp，编码325个氨基酸。LcGal-9不具有信号肽和跨膜区，含有两个由短肽相连的CRD结构域，每个CRD均含有两个保守的糖结合位点H-NPR和WG-EE-。系统进化分析发现，LcGal-9与雀鲷（Stegastes partitus）等鱼类的galectin-9聚为一支。qRT-PCR分析表明，LcGal-9 mRNA广泛分布于大黄鱼的各种组织，其中在肝脏中的表达量最高。Western blot结果显示，肝脏、脾脏、肠道等组织中LcGal-9蛋白的含量丰富，而在肌肉和血浆中没有检测到LcGal-9蛋白。PolyI:C刺激后，肝脏、脾脏和头肾中的LcGal-9 mRNA在多个时相均显著上调；相反， LPS和副溶血弧菌刺激后，LcGal-9在三种组织中的表达量普遍下调。刺激隐核虫感染后，鳃、皮肤、脾脏和头肾中的 LcGal-9在感染初期均明显升高。体外重组表达的 LcGal-9（rLcGal-9）具有不依赖 Ca2+的生物学活性，不仅可以凝集人、家兔和大黄鱼的红细胞，对革兰氏阴性菌溶藻弧菌和嗜水气单胞菌也具有凝集作用。α-乳糖和LPS能抑制rLcGal-9的凝血活性。免疫组化结果表明，PolyI:C和副溶血弧菌刺激后，脾脏中LcGal-9蛋白量增加。以上结果为研究LcGal-9在大黄鱼先天免疫应答中作用提供了依据。 LcNTC属于C-型凝集素家族，其cDNA全长859 bp，开放阅读框（ORF）465 bp，编码154个氨基酸。LcNTC的N端有一个信号肽和一个跨膜区，C端含有一个CRD结构域，其中含有甘露糖结合位点 EPN和四个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统分析表明， LcNTC与鱼类C-型凝集素和多种Nattectin-like蛋白具有较近的亲缘关系。LcNTC mRNA在大黄鱼各组织中均有表达，其中鳃中的表达量最高。LPS、PolyI:C和副溶血弧菌刺激后，肝脏、脾脏和头肾中 LcNTC的表达量在不同时相显著升高。刺激隐核虫感染后，鳃、皮肤、脾脏和头肾中LcNTC也呈现出不同程度的上调。体外重组表达的LcNTC（rLcNTC）具有Ca2+依赖性的凝集活性，可以凝集人、家兔和大黄鱼的红细胞，甘露糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖和 LPS对 rLcNTC的红细胞凝集活性均具有抑制作用。此外，rLcNTC对多种革兰氏阳性菌和阴性菌均表现出较强的凝集效果。上述研究结果表明，LcNTC可能作为重要的模式识别受体，参与了大黄鱼对细菌、病毒和寄生虫的免疫防御。
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