摘要
肝脏是生物体内最大的腺体，具有分泌、生物转化等多种生理功能，但损伤因素如病毒、药物、酒精等可导致其功能障碍，引起肝组织变性、坏死。长期处于肝损伤而缺乏有效的治疗，往往容易病情恶化，甚至导致肝硬化、肝癌。目前临床上常用的西药甘草酸二铵、联苯双酯、还原型谷胱甘肽等，虽有一定作用，但远期疗效不稳定，部分药品价格不菲，不良反应渐有报道，限制了临床应用，故中医药防治肝损伤具有重要的临床意义，也越来越受到重视。 中药蒲葵子为广东省常见植物棕榈科蒲葵树(Livistona chinensis R.Br.)的种子，在广东、广西、福建和台湾等地民间应用广泛，用于治疗肝癌和肝炎。文献报道蒲葵子的水提物、乙醇提取物和乙酸乙酯提取物均有一定的抗癌活性，能够抑制人肝癌细胞株（HepG2和BEL-7402）等多种癌细胞增殖;蒲葵子的黄酮类化合物以及酚类成分具有抗氧化活性。众所周知，活性氧(ROS)累积能导致肝脏损伤，因此，蒲葵子可能具有一定的抗氧化和保肝活性。 目的: 通过体内与体外实验，研究蒲葵子不同极性部位的抗氧化和保肝作用，探究其可能的作用机制。 方法: 1.通过清除DPPH-自由基和超氧阴离子自由基（O2-）实验考察蒲葵子乙醇提取物中最佳抗氧化活性部位。 2.MTT法测定不同浓度蒲葵子乙酸乙酯部位(ethyl acetate fraction separatedfrom the fruit of Livistona chinensis，EFLC)对人正常肝细胞LO2的细胞毒性;MTT法联合流式细胞仪和细胞核染色剂Hoechst3342考察EFLC对H2O2诱导的LO2细胞氧化应激损伤的保护作用;试剂盒法检测细胞中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量。 3.BABL/C小鼠连续灌胃一周EFLC预防给药7天后尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤模型，测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量和肝脏组织匀浆中MDA、T-SOD以及GSH-PX含量，H&E染色观察小鼠肝脏的组织学变化，探究EFLC对急性肝损伤的保护作用;WesternBlot法检测小鼠肝脏组织的Caspase-3，Caspase-8，Bax，Bcl-2，Fas和Fasl蛋白表达水平。 结果: 清除DPPH-自由基和超氧阴离子自由基(O2-)体外实验，结果显示EFLC抗氧化能力最佳;对于H2O2诱导的细胞氧化应激损伤，EFLC预防给药能够减少LO2细胞凋亡，升高抗氧化酶表达水平;对于ConA诱导小鼠急性肝损伤，EFLC预防给药（连续灌胃一周）能够显著降小鼠血清的ALT和AST水平，升高肝脏匀浆中的GSH-PX和T-SOD表达水平，降低MDA值，减轻ConA引起的小鼠的肝脏组织学伤害;实验结果显示EFLC具有保肝和抗氧化作用，其机理可能与EFLC能够下调ConA引起的肝损伤的小鼠肝脏组织中的Bax、Caspase-3、Caspase-8、Fas和FasL蛋白表达水平，上调小鼠肝脏组织中的Bcl-2蛋白表达水平有关。 结论: 1.在蒲葵子不同极性提取物中，EFLC抗氧化活性最佳。 2.EFLC对H2O2诱导的LO2细胞氧化应激损伤具有保护作用。 3.EFLC对ConA诱导的急性肝损伤具有保护保护作用，其机制可能与抗氧化损伤和下调ConA引起的肝损伤的小鼠肝脏组织中的凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-8、Fas和FasL蛋白表达水平，上调小鼠肝脏组织中的抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平有关。
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