摘要
铁皮石斛（Dendrobium catenatum）作为一种名贵中药材，其药用价值备受关注。然而，铁皮石斛生长缓慢，周期比较长，一般为三年。针对这些问题，目前已有很多研究成功开展了铁皮石斛种苗的快速繁殖与人工栽培;同时，铁皮石斛原球茎代替鲜条和枫斗成为替代药源的研究也取得了实质性进展，铁皮石斛原球茎有望被国家认证为新资源食品。但是，用传统固态培养，增殖效率低，生产周期长，而且原球茎中石斛多糖等成分含量有待提高。本研究以铁皮石斛原球茎为试验材料，对植物生物反应器扩繁原球茎的条件进行了优化;从野生铁皮石斛中分离得到三株内生真菌，且对原球茎与内生真菌进行了共培养研究，主要结论如下: 1.铁皮石斛原球茎的诱导与固体增殖。采自神农架的野生铁皮石斛种子无菌播种后诱导并增殖获得原球茎，萌发培养基:1/2 MS+NAA0.5mg/L+6-BA4.0mg/L+蔗糖30g/L+香蕉30g/L+琼脂6.5g/L;固体增殖培养基:1/2 MS+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+香蕉30g/L+牛奶100mL/L+琼脂6.5g/L。 2.植物生物反应器扩繁铁皮石斛原球茎的条件优化。分别从培养基中蔗糖浓度、马铃薯添加量、接种量及反应器间歇浸没频率四个方面对植物生物反应器扩繁铁皮石斛原球茎的培养体系进行了优化，再通过综合考察原球茎的平均鲜重、干重、增殖系数、水溶性多糖含量及原球茎生长状态等生理生长指标得到最适的培养条件。最佳培养条件为:蔗糖浓度30g/L，马铃薯汁添加量50g/L，接种量120g/L，一间歇浸没频率3min/8h。 3.铁皮石斛内生真菌的分离鉴定与培养条件试验。从铁皮石斛茎、根分离纯化出三株内生真菌。经形态学和分子生物学鉴定，菌株DCN-1与蚀丝霉属Myceliophthoma的相似度最高，亲缘性最近;而菌株DCN-2和菌株DCN-3均属于镰孢霉属Fusamium。三个菌株的培养条件存在差异性，菌株DCN-1的最佳培养条件为pH8.0、培养温度35℃;而菌株DCN-2和DCN-3的培养条件相同，均为pH7.0、培养温度30℃。 4.铁皮石斛原球茎与内生真菌的共培养研究。研究报道铁皮石斛的主要药用成分为多糖类物质，本实验中铁皮石斛原球茎与内生真菌菌株DCN-1共培养后多糖含量高达30.26％，比没有共培养的原球茎提高了6.82％，而内生真菌菌株DCN-2和DCN-3不能提高铁皮石斛原球茎中的多糖含量。并对菌株DCN-1与原球茎共培养的最适培养条件（马铃薯汁添加量和培养温度）进行了优化，得到了共培养的最佳培养条件为:马铃薯汁添加量为50 g/L、共培养温度为30℃，且在最适培养条件下共培养的原球茎多糖含量比没有共培养的提高了9％左右。 本研究建立了利用植物生物反应器高通量扩繁铁皮石斛原球茎的培养方法，用分离到的内生菌促进了铁皮石斛原球茎中多糖的产生量，为铁皮石斛原球茎的产业化应用提供了基础。
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