摘要
目的：研究JAK/STAT信号通路在肠道病毒71型（EV71）感染THP-1细胞中的作用机制，阐明EV71感染THP-1细胞后JAK/STAT信号通路关键蛋白的变化，为抗病毒药物的研发提供新的途径和思路。 方法：人横纹肌肉瘤（RD）细胞扩增 EV71，采用Reed-Muench测定病毒滴度。采用实时荧光定量（real-time qRT-PCR）法检测EV71感染人单核巨噬细胞（THP-1）后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS和MXA的mRNA水平和IFN-β的产生，观察IFN-β1a（1000u/ml）和IFN-α2b（1000u/ml）对EV71感染及复制的作用，并采用Western blot分析JAK1、TYK2、IFNAR及转录因子STAT1和STAT2磷酸化水平,以及 JAK/STAT信号通路转录因子STAT1抑制剂Fludarabine(20μM)和慢病毒介导的shRNA-STAT1沉默对4种干扰素刺激基因及EV71/VP1表达水平的影响。 结果：EV71感染 THP-1细胞后，IFN-β mRNA的相对表达量上调，并刺激了MXA、OAS1和ISG56 mRNA的表达及JAK1、TYK2及STAT1的磷酸化水平。与EV71感染组相比，EV71感染的THP-1细胞经Ⅰ型干扰素（IFN-α2b和IFN-β1a）处理后JAK1、TYK2及STAT1磷酸化水平明显上调，而IFNAR未见明显变化，并抑制EV71复制。THP-1细胞经STAT1抑制剂Fludarabine（20μM）处理后，STAT1总蛋白及其磷酸化水平表达下降，MXA、OAS1和ISG56mRNA表达量及EV71/VP1蛋白的表达水平降低。慢病毒介导的shRNA-STAT1沉默也出现相似的结果。 结论：EV71感染可促进THP-1细胞内JAK/STAT信号通路的活化，并激发机体固有免疫应答。
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