摘要
目的： 本研究将转化生长因子-β激活激酶1（TGF-β activated kinase-1，TAK1）抑制剂作用于糖尿病 db/db小鼠，检测小鼠一般指标的变化，通过PAS染色、透射电镜观察肾组织病理形态学变化，采用免疫组化、Western blot蛋白印迹法等方法检测肾组织相关炎症指标的表达，探讨TAK1抑制剂(5Z-7-oxozeaenol，OZ)对糖尿病db/db小鼠肾脏的可能作用及机制。 方法： 将12只健康雄性WT小鼠，24只健康雄性db/db小鼠随机分为3组：1.健康对照组，即WT组，包含12只WT小鼠；2.模型组，即db/db组，包含12只db/db组；2.抑制剂组，即db/db+OZ组，包含12只db/db小鼠，OZ2mg/kg隔日腹腔注射。于用药后第8，12周末分别测定各组小鼠的血糖、体重、肾重及24h尿白蛋白排泄率；光镜、电镜观察肾组织的病理改变；免疫组化方法检测炎症相关指标NF-κB p65, MCP-1,TNF-α及TGF-β1的表达情况；Western blot方法检测p-TAK1, TAB1及IL-1β蛋白表达。 结果： 1.db/db小鼠逐渐出现多饮、多食、多尿及消瘦等糖尿病症状，而db/db+OZ组小鼠上述症状有所减轻。 2.8-12周db/db小鼠血糖、体重、肾重、UAER较WT小鼠明显升高，比较有显著差异(P<0.01)，而db/db+OZ小鼠较db/db小鼠相比体重、肾重、UAER明显下降，差异有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。 3.PAS染色观察8-12周WT小鼠PAS强阳性范围较少；db/db小鼠PAS强阳性范围较对照组明显增多；而db/db+OZ小鼠PAS强阳性范围较db/db组减少。 4.电镜观察8-12周 WT小鼠肾小球基底膜均匀一致，无电子致密物沉积，足突分布均匀无融合；db/db小鼠第8周开始肾小球系膜细胞及系膜基质增生，基底膜不规则增厚，局部呈丘状隆起，相邻足突出现融合或脱落，12周病变更加严重；db/db+OZ小鼠病变明显减轻。 5.免疫组化法示8-12周 db/db小鼠肾组织 NF-κB p65，MCP-1，TNF-α, TGF-β1表达较WT小鼠明显增强，比较差异有统计学意义(P<0.05)；而db/db+OZ组小鼠与db/db小鼠相比表达明显减弱，差异有统计学意义(P<0.05)。 6.Western blot结果示8-12周db/db小鼠p-TAK1, TAB1, IL-1β蛋白表达较WT小鼠增加(P<0.05)，而db/db+OZ组小鼠较db/db小鼠肾组织这些指标蛋白表达下降(P<0.05)。 结论： 1.应用TAK1抑制剂注射后检测糖尿病 db/db小鼠肾组织相关指标的表达，发现NF-κB p65，p-TAK1, TAB1的表达下调及MCP-1，TGF-β1,TNF-α及IL-1β等相关因子的表达明显下降； 2. TAK1抑制剂可能通过抑制TAK1的表达下调NF-κB信号通路，减少炎症因子的表达，从而抑制肾脏局部炎症反应，减轻糖尿病的肾脏损伤。
NETL