基于TGF-β/Smads信号通路研究镰形棘豆提取物对肾间质纤维化的作用及机制

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中文摘要：目的：通过观察镰形棘豆提取物含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的作用，探讨其在肾间质纤维化方面的作用及机制。方法：采用镰形棘豆提取物（300mg/kg）给大鼠灌胃，每天2次，连续3天。3天后大鼠股动脉采血，分离血清，即得镰形棘豆提取物含药血清。体外培养HK-2细胞，培养基为含10%胎牛血清的DMEM/F12（1:1）；细胞分为4组：空白对照组、空白血清对照组（TGF-β110ng/ml+10%空白血清）、镰形棘豆提取物含药血清组（TGF-β110ng/ml+10%镰形棘豆提取物含药血清）、转化生长因子-β1诱导组（TGF-β110ng/ml）。药物干预细胞24h后，采用免疫组化技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙粘蛋白（E-cadherin）的表达，ELISA技术测Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）和纤连蛋白（FN）的含量，荧光定量PCR检测转化生长因子-β受体I（TβRI）、受体II（TβRII）的mRNA表达，Western blot检测Smad2、smad3的蛋白表达。结果：正常的HK-2细胞只表达E-cadherin，不表达α-SMA，但经TGF-β1诱导后细胞转分化，E-cadherin的表达减弱，α-SMA表达增强。药物干预后，α-SMA表达明显减弱，E-cadherin表达增强。与空白对照组相比，TGF-β1诱导组ColⅠ、ColⅢ、FN的含量显著增加，与TGF-β1诱导组相比，镰形棘豆提取物含药血清组ColⅠ、ColⅢ、FN的分泌显著下降，72h时作用更为显著。与空白对照组相比，TGF-β1诱导组TβRI、TβRII的mRNA表达和Smad2、Smad3的蛋白表达显著上升；与TGF-β1诱导组相比，镰形棘豆提取物含药血清组TβRI、TβRII mRNA表达和Smad2、Smad3蛋白表达减少。空白血清则无此作用。结论：镰形棘豆提取物能够抑制肾小管上皮细胞转分化，减少细胞外基质成分分泌，调控Smads信号通路，在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。

作者：

李钦

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关键词：

肾间质纤维化镰形棘豆提取物含药血清转化生长因子-β1 细胞转分化

授予学位：

硕士

学科专业：

中西医结合·中西医结合基础

导师：

程卫东

学位年度：

2016

学位授予单位：

兰州大学

语种：

中文

中图分类号：