摘要
目的：宫颈癌是全世界导致妇女死亡的最主要恶性肿瘤之一，近年来发病率呈明显上升趋势，发病年龄亦趋于年经化。宫颈癌的治疗目前仍以手术治疗为主，辅以化学药物治疗和放射治疗。但手术切除创伤较大，功能受损严重；放化疗常常伴有严重的并发症，且医疗费用昂贵，疗效不甚满意。近年来研究发现，HPV16亚型感染是激发宫颈上皮恶性转化的最主要因素，但目前尚无抑制HPV基因表达和功能活性的有效方法，若能解决这一难题，将是宫颈癌防治工作的一大突破。异紫堇碱(Isocorydine，ICD)是在秃疮花中发现的一种异喹啉类生物碱单体，可从植物中直接提取也可化学合成制得。已有研究发现异紫堇碱可以在体外抑制携带不同HPV亚型的人宫颈癌Hela和SiHa细胞株中E6、E7基因的表达，本文旨在研究异紫堇碱抑制HPV16E6表达的具体作用和机制，此研究的深入可能使异紫堇碱成为一种治疗HPV感染和宫颈癌的新的有效中药单体，或为以其为基础设计一类新药提供理论依据。 方法：体外培养携带HPV16E6的SiHa细胞，利用MTT实验初步检测异紫堇碱对SiHa细胞活性产生的影响，并通过流式细胞学方法检测处理后的SiHa细胞凋亡和细胞周期的改变。采用全基因组基因芯片表达谱技术测定异紫堇碱处理后的SiHa细胞株在转录基因水平上表达的改变，利用RT-PCR手段验证芯片结果后，通过Western-blot验证其在蛋白质水平发生的改变。 结果：异紫堇碱对宫颈癌SiHa细胞增生具有明显的抑制作用，MTT实验结果显示处理72h时最高抑制率可达68.69%。流式细胞术检测结果可发现异紫堇碱对SiHa细胞在各个时间点及浓度的总凋亡率均在6%以下，细胞周期结果显示发生了 G1/S期阻滞。由全基因组芯片结果中筛选出有意义的目的基因Caspase14。CLCA2，NDRG1以及CDH1均表达上调，并且经RT-PCR验证结果可靠，Western blot结果显示其对应的蛋白质水平上表达同步升高。此外，在Western blot实验中我们同时验证了Vimentin、HPV16E6以及PARP表达下调，E-Cadherin、P21以及P53表达上调。 结论：异紫堇碱通过P53- P21途径引发SiHa细胞周期阻滞，抑制细胞增殖，同时调控CLCA2，NDRG1，Caspase14等多个分子逆转上皮间充质转化作用，抑制细胞的侵袭和转移，促进宫颈癌SiHa细胞向上皮细胞方向转化从而抑制肿瘤的发生发展，发挥其抗癌作用。
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