摘要
肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan recognition proteins，PGRPs）作为一个主要的模式识别受体，在家蚕Bombyx mori的天然免疫中具有重要的作用。本研究主要探讨家蚕PGRP-L1基因的功能及其所参与的免疫信号通路。本实验通过RT-PCR扩增获得家蚕PGRP-L1基因。利用微生物诱导实验对5龄起蚕分别注射大肠杆菌Escherichia coli、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和PBS，12 h后取体壁和头部提取RNA，然后采用RT-PCR和凝胶电泳技术测定BmPGRP-L1基因的表达水平；利用RNA干涉实验向5龄起蚕注射PGRP-L1 dsRNA或PBS，6 h后再分别注射3种灭活的微生物或PBS，然后检测家蚕体壁及头部的免疫相关转录因子(Rel，Cactus和Relish)以及家蚕多个抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)基因(攻击素、Moricin、葛佬素)的表达情况。 本文从家蚕的组织中克隆了BmPGRP-L1基因，通过序列分析发现BmPGRP-L1与果蝇的DmPGRP-LC的相似度较高，而果蝇的DmPGRP-LC在被革兰氏阴性菌感染后从而激活Imd途径，那么家蚕BmPGRP-L1是否参与Imd信号通路？ 微生物诱导实验显示注射大肠杆菌的实验组比注射PBS的对照组BmPGRP-L1基因转录水平显著上调，而注射酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的实验组BmPGRP-L1转录水平没有变化；利用RNAi技术成功敲低BmPGRP-L1表达。对5龄敲低的家蚕注射灭活的微生物，敲低实验组relish因子表达低于正常对照组，相应地抗菌肽表达也有不同程度的下调。 微生物诱导实验结果显示BmPGRP-L1基因参与家蚕对革兰氏阴性菌大肠杆菌的免疫响应；RNAi实验结果显示BmPGRP-L1基因在家蚕的体壁和头中参与Imd信号通路。这些结果说明BmPGRP-L1基因在家蚕的先天性免疫中扮演着重要的角色。
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