非诱导型毕赤氏酵母菌产重组人血清白蛋白发酵条件的优化

扫码查看

原文链接

NETL

中文摘要：人血清白蛋白（HSA）是一种血液蛋白，相对分子量为66.5kDa，主要用于烧伤、休克、失血等方面的治疗。目前使用的药用人血清白蛋白多为从人血浆中直接提取获得，但该方法获得量较少，因此寻找一种新型的生产方法迫在眉睫。本文以非诱导型毕赤氏酵母NCY-1为出发菌株，以提高发酵液中的重组人血清白蛋白（rHSA）产量为主要研究目标，在摇瓶水平和10L机械搅拌式生物反应器水平上进行了研究，发酵液中的重组人血清白蛋白浓度通过高效液相色谱等方法进行检测，最终研究的主要结果如下： 1、通过正交实验，得到菌株NCY-1的最优培养条件为葡萄糖40g/L，甘油10g/L，酵母浸粉40g/L，KH2PO40.2g/L，营养盐1mL/L，培养基灭菌后接种，培养96h，发酵液中rHSA最高产量为339mg/L。 2、在10L机械搅拌式生物反应器的水平上，发酵前期维持发酵液中的pH值为5.8，当pH值上升时改变pH值为7.0，并且当发酵液中的残糖量降低至3.0g/L时，补加葡萄糖，最终可以达到的最大菌体浓度对数值为9.71，最高rHSA的产量为219mg/L。 3、菌株NCY-1在发酵过程中产胞外蛋白酶，该胞外蛋白酶在发酵后期会分解发酵液中的rHSA，使rHSA产量下降，通过流加(NH4)2SO4并且维持发酵液中的铵离子浓度为3.0g/L时，能够有效地抑制胞外蛋白酶的活力，最后可以达到的最高rHSA产量为317.35mg/L。 4、通过指数流加可以得到的最大菌体浓度对数值为10.92，但由于受到发酵液自身体积的限制，该方法不能无限提高菌体浓度。通过指数流加补料的方法得到的rHSA最大产量为687.05mg/L。

作者：

战伟超

展开 >

关键词：

重组人血清白蛋白毕赤氏酵母非诱导型发酵条件优化液相色谱检测

授予学位：

硕士

学科专业：

生物化工

导师：

徐世艾、林剑

学位年度：

2016

学位授予单位：

烟台大学

语种：

中文

中图分类号：