摘要
目的: 运用龟鹿二仙胶干预斑马鱼糖皮质激素诱导骨质疏松(Glucocorticoid inducedosteoporosis，GIOP)模型，观察其治疗效果，分析其作用机制。 方法: 1、采用成年斑马鱼建立GIOP模型。运用Masson和HE观察斑马鱼鱼鳞微观结构，Western blot法检测斑马鱼TGF-β、Smad3、P-Smad3蛋白的表达，分析骨质疏松(Osteoporosis，OP)和TGF-β/Smad信号通路之间的联系。 2、运用龟鹿二仙胶对该模型进行干预。采用Masson和HE观察斑马鱼鱼鳞的微观结构，检测斑马鱼炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β的含量，RT-PCR检测斑马鱼TGF-β、Smad3、AP-1、NF-κBP65基因表达，Western blot法检测斑马鱼TGF-β、Smad3、P-Smad3、AP-1、P-NF-κBP65、NF-κBP65、P-Iκβα、Iκβa蛋白的表达，分析龟鹿二仙胶基于TGF-β信号和NF-κBP信号治疗GIOP斑马鱼的作用机制。 结果: 1、建立GIOP斑马鱼模型。Masson及HE染色观察:空白组Ⅰ型胶原致密规整，地塞米松低、中剂量组与空白组相比没有差异;地塞米松高剂量组Ⅰ型胶原松散紊乱，与空白组相比有差异。检测蛋白表达:与空白组相比，地塞米松高剂量组TGF-β与P-Smad3蛋白降低(P＜0.01)，地塞米松低剂量和中剂量组没有差异(P＞0.05)。 2、Masson及HE染色观察:空白组斑马鱼Ⅰ型胶原致密规整，地塞米松组Ⅰ型胶原松散紊乱;给予龟鹿二仙胶低、中、高剂量和骨化三醇后，四组均能显著改善地塞米松组Ⅰ型胶原松散紊乱的情况。 3、检测炎症因子:地塞米松组较空白组IL-6、TNF-α、IL-1β含量升高(P＜0.01)，骨化三醇与龟鹿二仙胶低、中、高剂量组较地塞米松组IL-6、TNF-α、IL-1β含量降低(P＜0.01)。 4、检测mRNA表达:地塞米松组较空白组TGF-β、Smad3含量降低(P＜0.01)，NF-κBP65、AP-1含量升高(P＜0.01)，骨化三醇与龟鹿二仙胶低、中、高剂量组较地塞米松组TGF-β、Smad3含量升高(P＜0.01)，NF-κBP65、AP-1含量降低(P＜0.01)。 5、检测蛋白表达:地塞米松组较空白组TGF-β、P-Smad3含量降低(P＜0.01)，NF-κBP65、IκBα、AP-1含量升高(P＜0.01)，骨化三醇与龟鹿二仙胶低、中、高剂量组较地塞米松组TGF-β、P-Smad3含量升高(P＜0.01)，NF-κBP65、IκBα、AP-1含量降低(P＜0.01)。 结论:1、成功建立斑马鱼GIOP模型。2、龟鹿二仙胶经TGF-β/Smad3信号通路促进胶原合成治疗OP。3、龟鹿二仙胶调控核转录因子NF-κB和AP-1抑制炎症反应治疗OP。
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