摘要
研究背景: 抑郁症作为当今世界十大心理疾病之一，越来越严重地危及到人们的身心健康和正常生活，常见的抑郁症症状还包括神经系统功能失调，如自发性运动、睡眠及体重改变等。随着社会竞争的日益压力加剧，人们承受的生理、心理压力越来越大，抑郁症的发病率呈现不断升高趋势。因此加强对抑郁症发病机制和防治的研究，具有十分重要的意义。 白藜芦醇(resveratrol，Res)是一类从葡萄、藜芦、虎杖等植物中提取的天然多酚类化合物，较易透过血脑屏障进入组织。Res具有强烈的抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保护心脑血管等多种生物学活性。近年来，Res在神经系统中的作用也引起越来越多的关注。研究表明，Res可通过调节脑内5-羟色胺，去甲肾上腺素水平，激活单胺氧化酶-A和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)等因素来发挥抗抑郁作用。研究表明，在慢性不可预知温和刺激模型(chronic unpredictable mild stress，CUMS)中，Res可以调节在海马和杏仁核中血清皮质酮的水平，上调BDNF的含量。海马在学习和记忆中有发挥重要的作用，同时参与下丘脑-垂体-肾上腺的调节，而在抑郁症中，海马的上述两项功能均发现明显改变。另外，海马，前额叶皮质(prefrontal dorsolateral cortex，PFC)，杏仁核相互联系，直接影响情绪、认知，因此和抑郁症的主要症状相关。但是在CUMS模型中Res如何通过逆转CUMS大鼠海马和PFC内Akt/mTOR的表达来发挥抗抑郁作用的机制尚不明确。 目的: 本课题我们拟选择CUMS动物模型，研究Res如何改善大鼠的行为学特征，通过测量海马和PFC中氧化应激指标和Akt/mTOR的磷酸化水平，阐明Res抗抑郁作用机制。 方法: 1.分组将180-200克的雄性Wistar大鼠随机分成正常(Control)组，正常+Res(Control+Res)组，模型(CUMS)组，模型+Res（CUMS+Res组），模型+Ketamine(CUMS+Keta)组。 2.造模方法 Control组和Control+Res组不给予任何刺激，正常饲养。CUMS组，CUMS+Res组和CUMS+Keta组每周随机给予7种刺激（分别是禁食24小时，禁水24小时，噪音3小时，45°倾斜笼子7小时，打湿笼子24小时，在4℃水中强迫游泳5分钟），连续刺激4周。 3.干预方法 Control组，刺激前30分钟腹腔注射生理盐水。Control+Res组，刺激前30分钟腹腔注射Res(80mg/kg)。CUMS组，刺激前30分钟腹腔注射生理盐水。CUMS+Res组，刺激前30分钟腹腔注射Res(80mg/kg)。CUMS+Keta组，造模前30分钟腹腔注射生理盐水，在最后一天，行为学实验60分钟之前，对该组的大鼠腹腔注射Keta(20mg/kg)。 4.检测指标及方法 4.1.连续4周刺激完成后，首先对各组大鼠进行旷场试验(open field test，OFT)，检测动物探究行为及情绪反应。 4.2.OFT完成后，对各组大鼠进行强迫游泳实验(forced swimming test，FST)，检测大鼠的行为绝望和无助状态。 4.3.FST完成后各组大鼠进行糖水消耗试验(sugar preference test，SPT)，检测大鼠兴趣缺失的状态。 4.4.利用试剂盒检测大鼠海马和PFC内丙二醛(malondialdchydc，MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的水平。4.5利用Western blot法检测大鼠海马和PFC内，Akt和mTOR的磷酸化水平。 结果: 1.行为学变化 1.1.在SPT中，Control组和Control+Res组糖水偏好率没有显著差异;与Control组比较，CUMS组大鼠糖水偏好率显著减少(p＜0.01);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.01)糖水偏好率明显增加。 1.2.在FST中，Control组和Control+Res组游泳不动时间没有显著差异;与Control组比较，CUMS组大鼠游泳不动时间显著增加(p＜0.001);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.01)和CUMS+Keta组(p＜0.001)游泳不动时间明显减少。13在OFT中，Control组和Control+Res组水平运动得分，垂直运动得分，自我修饰得分没有显著差异;与Control组比较，CUMS组大水平运动得分(p＜0.05)和自我修饰得分(p＜0.05)都大幅度下降，而垂直运动得分差异性没有统计学意义(p＞0.01);与CUMS组比较，CUMS+Res组水平运动得分(p＜0.05)和自我修饰得分明显增加(p＜0.05)，而垂直运动得分差异性没有统计学意义(p＞0.05)，CUMS+Keta组水平运动得分(p＜0.01)和自我修饰得分明显增加(p＜0.05)，而垂直运动得分差异性没有统计学意义(p＞0.05)。 2.海马和PFC中MDA含量2.1海马MDA含量Control组和Control+Res组之间比较，海马内MDA含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组海马内MDA含量均显著增加(p＜0.001);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.001)和CUMS+Keta组(p＜0.001)海马内MDA含量明显降低。 PFC内MDA含量Control组和Control+Res组之间比较，PFC内MDA含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组PFC内MDA含量均显著增加，(p＜0.001);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.001)和CUMS+Keta组(p＜0.001)PFC内MDA含量明显降低。 3.海马和PFC内SOD含量 3.1.海马内SOD含量Control组和Control+Res组之间比较，海马内SOD含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组PFC内SOD含量均显著降低，(p＜0.001);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.01)海马内SOD含量明显增加。 3.2.PFC内SOD含量Control组和Control+Res组之间比较，PFC内SOD含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组PFC内SOD含量均显著降低(p＜0.01);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.01) PFC内SOD含量明显增加。 4.海马和PFC内mTOR、p-mTOR含量 4.1.海马内mTOR含量不同组别之间没有明显差异(p＞0.05);Control组和Control+Res组之间比较，海马内p-mTOR含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组海马内p-mTOR含量均显著减少(p＜0.05);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.05)海马内p-mTOR含量明显增加。 4.2.PFC内mTOR含量不同组别之间没有明显差异(p＞0.05);Control组和Control+Res组之间比较，PFC内p-mTOR含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组PFC内p-mTOR含量均显著减少(p＜0.05);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.01)PFC内p-mTOR含量明显增加。 5.海马和PFC内Akt、p-Akt含量 5.1.海马内Akt含量不同组别之间没有明显差异(p＞0.05);Control组和Control+Res组之间比较，海马内p-Akt含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组海马内p-Akt含量均显著减少(p＜0.01);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.05)海马内p-Akt含量明显增加。 5.2.PFC内Akt含量不同组别之间没有明显差异(p＞0.05);Control组和Control+Res组之间比较，PFC内p-Akt含量无显著差异(p＞0.05);与Control组比较，CUMS组PFC内p-Akt含量均显著减少(p＜0.05);与CUMS组比较，CUMS+Res组(p＜0.05)和CUMS+Keta组(p＜0.05) PFC内p-Akt含量明显增加。 结论: 1.在SPT中，CUMS使大鼠出现快感缺失的抑郁症状，糖水偏好率减少;在FST中，CUMS使大鼠出现行为绝望状态，游泳不动时间增加;在OFT中，CUMS使大鼠出现精神运动迟缓的症状，对自身关注度下降，水平运动得分和自我修饰得分都大幅度下降。Res能改善CUMS大鼠精神运动迟缓的症状，提高了对自身的关注度，通过自我理毛缓解在新异环境中的紧张和冲动。提示Res能有效改善CUMS抑郁大鼠行为学变化。 2.CUMS增加大鼠海马和PFC内MDA的含量，Res能有效降低CUMS大鼠海马和PFC内MDA的含量。 3.CUMS降低大鼠海马和PFC内SOD的含量，Res能有效增加CUMS大鼠海马和PFC内SOD的含量。 4.CUMS降低大鼠海马和PFC内Akt和mTOR的磷酸化水平。Res能有效增加CUMS大鼠海马和PFC内Akt和mTOR的磷酸化水平。
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