摘要
旋毛虫病是由旋毛虫感染宿主引起的一种严重的寄生虫病。这种感染大多数情况下是食源性的。宿主被旋毛虫感染的过程中虫体可产生各类抗原与宿主免疫系统相互作用，从而危害宿主健康。天然免疫系统能在第一时间发现识别并抵抗病原体的入侵。NOD1受体是一种关键的天然免疫受体，在许多细胞和组织中均存在。一般NOD1受体被病原体激活后可活化下游的效应分子RIP2，它的能够引起caspase-1、NF-κB、MAPKs等信号路径被激活，诱导TNF-α、 IL-1β和IL-6等炎性因子分泌，进而引起多种免疫应答反应。研究表明，NOD1受体与许多种病原体感染引起的免疫应答相关，如细菌、真菌、病毒、寄生虫等。而在旋毛虫感染中关于NOD1受体的研究未见报道。所以，本研究应用荧光定量PCR、Western blot、ELISA等实验方法来着重研究旋毛虫感染对宿主NOD1受体通路的影响，从而探讨旋毛虫感染与宿主免疫系统之间互相作用的机制。 依据GenBank中登录的小鼠NOD1、RIP2、NF-κB和GAPDH序列，设计并合成引物，建立以上基因的荧光定量PCR检测方法。在旋毛虫感染小鼠后0.5d、4d、7d、14d、21d、28d、35d应用荧光定量PCR检测其腹腔巨噬细胞及小肠、心脏、肺脏、肌肉组织中NOD1、RIP2和NF-κB mRNA表达水平。应用Western blot对腹腔巨噬细胞中NOD1、RIP2、NF-κB p65、NF-κB p-p65进行检测。应用ELISA测定小鼠腹腔巨噬细胞培养上清和血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量。 荧光定量PCR结果表明，旋毛虫感染小鼠后小鼠腹腔巨噬细胞中各目的基因表达量均呈现双峰的趋势，其中NOD1、RIP2和NF-κB mRNA在感染后0.5d和21d、4d和21d、0.5d和21d先后呈现两个峰值。在小肠和心脏中，感染不同时期各目的基因表达量都有升高，分别于感染后4d和14d达到峰值。在肺脏中，NOD1 mRNA表达量仅在感染后7d略增多，而RIP2的mRNA表达量在各个感染期均呈现上升趋势，并于感染后4d到达峰值。在肌肉中，各目的基因在感染初期变化不明显，而于感染后21d显著升高，28d到达峰值。Western blot结果表明，在旋毛虫感染小鼠后小鼠腹腔巨噬细胞中NOD1、RIP2和NF-κB p-p65表达量均有不同程度的升高，其变化趋势与荧光定量PCR结果相似。ELISA结果显示，感染旋毛虫小鼠腹腔巨噬细胞培养上清和小鼠血清中TNF-α、IL-6的含量均显著升高，而IL-1β的含量几乎没有变化。 另外，本研究在体外用旋毛虫肌幼虫ES抗原作用于健康小鼠腹腔巨噬细胞，并应用荧光定量PCR对细胞内NOD1、RIP2和NF-κB基因表达水平进行监测，Western blot对细胞内NOD1、RIP2、NF-κB p65、NF-κB p-p65表达量进行测定，ELISA测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的变化。荧光定量PCR结果表明，在一定的ES抗原作用浓度和时间范围内，细胞中各目的基因的表达量均随作用浓度和时间的增加而下降。Western blot结果表明，ES抗原的刺激可以使细胞内NOD1、RIP2和NF-κB p-p65蛋白表达量增加。ELISA结果显示，ES抗原的作用可以使细胞TNF-α和IL-6分泌量增多，但IL-1β变化不明显。 以上研究结果表明，旋毛虫感染可以引起小鼠NOD1受体的激活，上调NOD1受体通路中关键分子RIP2和下游分子NF-κB的表达，促进细胞因子TNF-α和IL-6的分泌。旋毛虫肌幼虫ES抗原可以激活并调节小鼠腹腔巨噬细胞中NOD1受体通路。此外，旋毛虫感染还可引起宿主NOD1受体免疫耐受。但是由于旋毛虫与宿主免疫系统之间互相作用机制的复杂性，两者之间如何作还需更加深入的研究。
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