摘要
紫草为紫草科紫草属植物紫草的干燥根，分为新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle) Johnst和内蒙紫草Arnebiaguttata Bung，中医临床主要用于血热毒盛、湿疹、水火烫伤等症。现代药理研究表明，紫草总色素具有抗炎、抗肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等作用，其中紫草素为主要活性成分。紫草素在紫草中含量较低，几乎不溶于水，体内吸收差，限制了其进一步开发利用。本课题对紫草素的提取，转化及其脂质体制备工艺进行了系统的研究。 目的： 1.研究紫草总色素的最佳提取工艺。 2.研究紫草素碱化萃取最佳转化工艺，以得到高纯度紫草素。 3.研究紫草素脂质体的制备工艺并进行质量评价。 方法： 1.单因素考察：以紫草总色素得率为指标，分别对提取温度、提取时间、提取次数、料液比进行考察，确定主要因素及水平；正交试验：以紫草总色素得率为指标，进行三因素三水平的正交试验，采用方差分析方法对正交试验结果进行统计学处理，确定紫草总色素最佳提取工艺，并进行工艺验证。 2.单因素考察：以紫草素转化率和纯度为指标，分别对转化温度、转化时间、料液比、氢氧化钠溶液的浓度进行考察，确定主要因素和水平；正交试验：以紫草素转化率指标，进行三因素三水平正交实验，采用方差分析方法对正交实验结果进行统计学处理，确定紫草素碱化萃取转化最佳工艺，并进行工艺验证；紫草素碱化萃取转化产物结构验证分析：对比转化前后的HPLC色谱图，同时结合1H-NMR，13C-NMR以及ESI-MS数据鉴定转化产物结构。 3.建立紫草素脂质体的HPLC含量测定方法；单因素考察：以紫草素脂质体包封率为指标，分别对溶剂类型、水合介质类型、水合介质体积、水浴温度、超声时间、紫草素与卵磷脂的比例、卵磷脂与胆固醇的比例进行考察，确定主要因素和水平；正交试验：以紫草素脂质体包封率为指标，进行三因素三水平正交实验，采用方差分析方法对正交实验结果进行统计学处理，确定紫草素脂质体的最佳制备工艺，并进行工艺验证；紫草素脂质体质量评价：采用HPLC法测定紫草素脂质体的包封率，采用负染法进行透射电镜实验，表征脂质体外观形态；马尔文激光粒度仪对紫草素ζ电位，粒径大小及分布进行测定；透析法测定脂质体的体外释放度。 结果： 1.单因素及正交实验确定紫草总色素最佳提取工艺：取紫草干燥根（粉碎成直径小于2cm细块）40g，置500mL锥形瓶中，加入240mL95%乙醇,水浴温度50℃浸提4h，抽滤，同样条件重复提取1次所得滤渣，抽滤，合并滤液，减压旋蒸回收95%乙醇，即得。工艺验证所得紫草总色素得率平均值为2.20%。 2.单因素及正交实验确定紫草素碱化萃取转化最佳提取工艺：精密称取最佳提取工艺所得紫草总色素浸膏（质量分数为32%）于500mL锥形瓶中，加入适量石油醚，水浴超声溶解，抽滤，加入2%氢氧化钠溶液128mL于滤液中，40℃水浴加热，反应4h后，将碱化水解液移入分液漏斗，加纯水萃取至下层不显蓝色，合并碱水萃取液，抽滤，加甲酸至pH5～6，静置12h，石油醚萃取至无色，减压旋蒸石油醚萃取液，50℃烘干，即得。工艺验证所得紫草素转化率平均值为53.86%，纯度平均值为95.60%，结构鉴定表明转化产物为紫草素。 3.紫草素脂质体HPLC含量测定方法学考查结果表明，测定方法符合分析的要求；经制剂工艺及处方筛选，确定最佳工艺及处方：精密称取卵磷脂45.0mg，胆固醇6.4mg于圆底烧瓶中，加入50mL石油醚-甲醇（3:5）的混合溶剂，搅拌溶解，再加入紫草素5.0mg，于40℃下减压旋蒸回收有机溶剂，在圆底烧瓶中形成均匀的紫红色脂质膜，然后加入0.9%NaCl溶液20mL，搅拌洗脱脂质膜1h，水浴超声5min（功率200W），0.45μm微孔滤膜过滤，静置5min，按同样条件反复超声与滤膜过滤一次，即得。验证试验结果表明，紫草素脂质体平均包封率结果为76.90%，平均粒径为187.73nm。脂质体质量评价结果为最佳工艺所制备的脂质体为圆形至椭圆形囊泡，分散性较好，大小较为均一，其粒径为200nm左右，ζ电位值为-38.94mV，ζ电位绝对值＞30mV，表面电性为负，体系稳点，具有缓释作用。 结论：紫草总色素的提取得率较高，工艺简单，能够为紫草素的碱化萃取转化实验提供前期物质基础；碱化萃取转化法所得紫草素的转化率及纯度较传统碱沉酸提或者乙醇-碱化转化法等有了大幅提高，能够为紫草素的脂质体实验提供物质基础。制备的紫草素脂质体包封率较高，各项质量指标符合标准。本课题对紫草素的提取转化及其脂质体工艺进行了比较系统的研究，将为紫草素的进一步开发利用奠定基础。
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