摘要
【目的】 1.阐明白藜芦醇预处理对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。 2.探讨白藜芦醇抑制 H2O2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡是否与 JNK/SAPK信号通路有关。 【方法】 将体外培养的人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）作为研究对象。首先采用CCK-8法筛选出最适H2O2处理时间及浓度。将HUVECs分为6组，依次为（1）对照组；（2）H2O2组；（3）H2O2+JNK抑制剂（SP600125）组；（4）H2O2+低浓度白藜芦醇（5μmol/L）组；（5）H2O2+中浓度白藜芦醇（10μmol/L）组；（6）H2O2+高浓度白藜芦醇（20μmol/L）组。白藜芦醇处理组和SP600125处理组分别予白藜芦醇和SP600125预处理1h，再予H2O2共同孵育30min和4h。处理结束后检测以下指标：倒置相差显微镜下观察细胞的形态学改变并拍照；采用CCK-8法测定细胞增殖活力，FITC Annexin V/PI流式双染法检测细胞凋亡率，Western blot法检测JNK、p-JNK、Bcl-2及Bax蛋白在细胞中的表达水平。 【结果】 1. H2O2处理时间及浓度的筛选：HUVECs的活性随着H2O2浓度的升高和作用时间的延长而呈下降趋势，当予100μmol/LH2O2作用4h时其细胞活性降至50%左右，为本实验理想的处理条件。 2.细胞形态学观察：倒置相差显微镜下，对照组细胞呈梭形或圆形，细胞数量多、排列紧密，呈铺路石状生长，仅见少量悬浮细胞；H2O2组的细胞皱缩变圆，细胞间隙增大，活细胞数量减少，悬浮细胞明显增加；与H2O2组比较，SP600125及不同浓度白藜芦醇预处理组，细胞生长状态改善，活细胞数量增加，悬浮细胞减少。 3.细胞活性检测：与对照组相比，H2O2组 OD值明显下降，细胞活性为（48.36±2.64）%（P＜0.01），与H2O2组比较，SP600125和不同浓度白藜芦醇预处理组，细胞活性分别升至（80.37±2.81）%、（70.70±3.21）%、（77.02±6.53）%和（85.72±3.70）%（P＜0.01）。 4.细胞凋亡率检测：与对照组相比，H2O2组细胞凋亡率明显增加（P＜0.01），凋亡率为（23.63±1.10）%；予SP600125和不同浓度白藜芦醇预处理后，凋亡 率分别降至（13.43±0.76）%和（12.60±1.21）%、（11.40±1.57）%、（11.10±1.25）%，与H2O2组比起来，差异具有统计学意义（P＜0.01）。 5.各蛋白表达水平的检测：与对照组相比，H2O2处理后p-JNK和Bax蛋白表达水平上升，而Bcl-2蛋白表达水平下降，予SP600125及不同浓度白藜芦醇预处理后，p-JNK和Bax蛋白表达水平呈下降趋势，而Bcl-2蛋白表达水平则呈上升趋势，且各组总JNK蛋白表达无明显差异。 【结论】 实验浓度的白藜芦醇可以提高HUVECs的活性，抑制H2O2诱导的细胞凋亡，这一作用的机制可能与抑制JNK/SAPK通路的激活和上调Bcl-2/Bax的比值有关。
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