摘要
特发性肺纤维化(IPF)是一种慢性不可逆的致死性疾病。在IPF的发展过程中，肺成纤维细胞受到激活并且分泌大量的细胞外基质，以及异常的损伤修复，最终导致了纤维化的形成。 肾素-血管紧张素系统(RAS)是本课题研究重点，包含血管紧张素转化酶(ACE)-血管紧张素(Ang)Ⅱ-AngⅡ-1型受体(AT1R)轴和ACE2-Ang(1-7)-Mas轴。AngⅡ和Ang(1-7)作为RAS中的代表性多肽，二者功能相对拮抗，在机体的水电解质代谢、血管收缩等维持机体生存方面有着重要作用，近些年发现其与纤维化有密切联系。前期的研究及近年对RAS在器官纤维化中的研究表明，ACE-AngⅡ-AT1R轴增加氧化应激，诱导心肌、血管、肝脏和肺脏的纤维化，而ACE2-Ang(1-7)-Mas轴通过拮抗ACE-AngⅡ-AT1R轴，降低氧化应激发挥抗纤维化作用。 本研究继续探讨ACE2-Ang(1-7)-Mas轴改善肺纤维化的新机制，并将自噬作为研究的新方向。自噬是细胞内各种组分被运送至溶酶体并被降解和重新利用的过程，不仅参与生理活动的调节，还参与调节氧化应激、器官纤维化等多种病理过程。自噬能够改善肺纤维化，但目前对于ACE2和Ang(1-7)在自噬方面的研究，主要在心脑血管系统，大多表现为抑制自噬，但也有诱导自噬的报道。ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的自噬水平如何，干预自噬对于氧化应激和肺纤维化的影响如何，将是本研究关注的重点。 目的： 探究ACE2-Ang(1-7)-Mas轴自噬水平如何，调控自噬对氧化应激和肺纤维化的影响。 方法： 1、原代肺成纤维细胞分离、纯化、鉴定及培养。 2、细胞ATP含量测定。 3、动物模型建立。 4、肺组织切片染色和免疫组化。 5、蛋白质免疫印迹法。 结果： 探究Ang(1-7)和ACE2对自噬蛋白表达水平的影响，干预ACE2-Ang(1-7)-Mas轴和自噬通路，检测自噬、胶原和NOX4蛋白表达水平。博来霉素诱导小鼠肺纤维化，评价小鼠肺组织纤维化水平和NOX4、自噬蛋白水平，进一步验证ACE2-Ang(1-7)-Mas轴改善肺纤维化的机制。 结论： 1.Ang(1-7)诱导自噬，降低AngⅡ诱导的胶原和NOX4水平，Mas拮抗剂A779通过抑制自噬逆转这一作用。 2.ACE2+/+肺成纤维细胞自噬水平增高，减轻AngⅡ诱导的胶原和NOX4水平，A779和自噬抑制剂逆转上述作用。 3.ACE2+/+小鼠对BLM诱导的肺纤维化有保护作用，表现为肺纤维化程度和氧化应激水平下降，自噬水平增高。
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