摘要
本文从以下几部分阐述维生素D3对炎症相关性结直肠癌的影响及作用机制的探究。 第一部分 1，25-二羟维生素D3对结肠癌细胞的影响研究 目的：探究1，25-二羟维生素D3(1，25(OH)2D3)对SW480结肠癌细胞的E-cadherin、PLEKHA7、miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表达水平的影响，以及SW480细胞的PLEKHA7是否可以调控microRNA的表达水平。 方法：给予SW480细胞100nmol/L1，25(OH)2D3或等量的DMSO干预48小时，用qRT-PCR和Western blotting检测E-cadherin、PLEKHA7的mRNA和蛋白表达水平，以及miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表达水平。通过转染siPLEKHA7敲降PLEKHA7的表达，用qRT-PCR检测miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表达水平。 结果：(1)100nmol/L1，25(OH)2D3干预48小时可以上调SW480细胞E-cadherin和PLEKHA7蛋白表达水平;(2)100nmol/L1，25(OH)2D3干预48小时可以使SW480细胞的miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表达水平显著上升(p＜0.05);(3)在SW480结肠癌细胞中，敲降PLEKHA7后miR-24的表达水平显著下降(p＜0.05)。 结论：1，25(OH)2D3可以上调SW480细胞的E-cadherin、PLEKHA7蛋白表达水平以及miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表达水平;8W480细胞的PLEKHA7参与miR-24表达水平的调控。 第二部分 维生素D3对炎症相关性结直肠癌小鼠模型的干预研究 目的：探究维生素D3(VitD3)对氧化偶氮甲烷(AOM)联合葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症相关性结直肠癌的治疗效果及其作用机制。 方法：雄性C57BL/6小鼠随机分为6组，第1组为空白对照组(Control)，不灌胃。第2-6组建立炎癌模型，其中第2组为模型对照组(Model)，不灌胃;第3组为盐水对照组(0)，从撤除2.5％DSS后（即W4）开始给予等量生理盐水灌胃;第4-6组为维生素D低、中、高剂量干预组，从撤除2.5％DSS后开始分别给予15、30和60IU/g/周的维生素D3（VitD3，商品名：英康利）灌胃。12周末统计小鼠结直肠成瘤数(tumor number，TN)和瘤负荷(tumor load，TL)，进行病理组织学评估，分别采用qRT-PCR和免疫组织化学染色对比结肠组织E-cadherin、PLEKHA7的mRNA和蛋白表达水平，并用qRT-PCR对比miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表达水平。 结果：(1)与盐水对照组(n=9，TN=7.44±0.53，TL=14.61±0.98mm)相比，中（n=9，TN=4.11±0.68，TL=6.94±1.69mm）和高剂量干预组(n=10，TN=4.40±0.64，TL=8.10±1.95mm)的维生素D3治疗可以显著降低AOM/DSS炎癌小鼠的成瘤数和瘤负荷(p＜0.05);(2)免疫组织化学结果显示VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠E-cadherin蛋白在结直肠上皮细胞细胞膜上的表达水平，中和高剂量干预组的免疫组织化学评分(3.89±0.42，3.80±0.39)均显著高于盐水对照组(2.44±0.44，p＜0.05);(3)免疫组织化学结果显示VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠PLEKHA7蛋白在结直肠上皮细胞细胞膜上的表达量，高剂量干预组PLEKHA7免疫组织化学评分(4.80±0.29)显著高于盐水对照组(3.111±0.31，p＜0.05)，且E-cadherin和PLEKHA7蛋白的免疫组织化学评分具有相关性(相关系数为0.741，P＜0.0001);(4)模型对照组结直肠组织miR-19a的表达水平与正常小鼠相比显著降低(p＜0.05)，VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠结直肠组织中miR-19a的表达水平(p＜0.05)。 结论：VitD3治疗可以抑制AOM/DSS诱导的小鼠炎癌，可能是通过提高炎癌小鼠结直肠上皮细胞细胞膜上E-cadherin和PLEKHA7蛋白表达水平发挥抗癌作用的。
NETL