摘要
显齿蛇葡萄是我国重要的类茶植物，藤茶为其主要加工产品，其加工过程中会产生大量的废弃茎。武陵山区每年藤茶产量约为10000吨，产生的废弃茎约为600吨。DMY是一种食品、药品添加剂和医药中间体，为显齿蛇葡萄的重要活性成分。目前高纯度的DMY主要从较贵的显齿蛇葡萄叶中提取，价格昂贵。因此如何利用显齿蛇葡萄制茶废弃茎这一丢弃资源提取DMY，提高显齿蛇葡萄种植和加工的经济效益，具有重要的现实意义。本文对从显齿蛇葡萄制茶废弃茎中提取、分离高纯度DMY进行了较深入全面的研究，结果如下： （1）建立了DMY的高效液相色谱检测方法和总黄酮的双波长分光光度检测方法，对显齿蛇葡萄不同部位DMY和总黄酮含量进行了测定。HPLC测定条件为：色谱柱系Kromasil C18，乙腈:0.05%磷酸（18:82）为流动相，流速为1.0 mL/min，柱温为27.8℃，检测波长为292 nm；得标准曲线方程为：C=0.000019S-2.726383， R2=0.9998，C∈(20.3，203μg/mL)。双波长分光光度法测定条件为：310 nm为测定波长，340 nm为参比波长， AlCl3为显色剂；得标准曲线方程为：C=18.509ΔA-0.19679，R2=0.9998，C∈(4，24μg/mL)。各部位总黄酮和DMY测定结果为：总黄酮和DMY含量最高的部位为嫩叶，其含量分别为15.01%、7.79%；DMY占总黄酮比例最高的部位为嫩茎，比例为64.31%；藤茶地上部位总黄酮和DMY含量均大于地下部位。 （2）系统研究了酶法提取显齿蛇葡萄制茶废弃茎中 DMY的工艺。得提取DMY最优工艺参数为：酶类型为复合酶、溶液pH=4.46、酶解温度45℃、酶添加量2.0%、料液比为1:20。在此条件下，DMY提取率为30.65%，纯度为23.40%。并与传统提取方法和超声波辅助提取法进行对比，结果酶法提取效果最佳。 （3）研究了活性炭分离DMY的工艺。在单因素基础上，采用响应面优化出ZX-1号活性炭分离DMY的最佳工艺条件为：pH=2.09，温度50.51℃，活性炭用量为19.80%。在此条件下，DMY的收率为96.99%，纯度由23.40%提高到33.29%。 （4）确定了DMY的溶剂萃取工艺条件。其优化条件为：萃取试剂为乙酸乙酯，萃取时间8.52 min，萃取温度59.26℃，料液比0.013 g/mL。在此条件下，DMY的收率为86.01%，纯度由33.29%提高到66.01%。 （5）系统研究了DMY的结晶工艺。采用乙醇浓度梯度对DMY进行结晶，通过正交实验得出最佳工艺条件为：养晶时间96 h，养晶温度为7℃，结晶试剂乙醇浓度为16.67%。在此条件下，进行3次结晶后，DMY收率为79%，纯度可以达到98%以上。 （6）采用UV、HPLC、IR、1H-NMR、13C-NMR对98%DMY进行结构表征。结果显示：从显齿蛇葡萄制茶废弃茎中提取的 DMY样品和对照品的吸收光谱一致，HPLC的出峰时间相同，IR的光谱图一致，1H-NMR、13C-NMR化学位移相同；说明提取的DMY样品和对照品的结构相同，是同一物质。 （7）在小试基础上进行扩大化试验，确定了从显齿蛇葡萄制茶废弃茎中提取DMY的工业化生产工艺流程。
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