摘要
目的： 葫芦素E（cucurbitacin E，CuE）是从葫芦科植物中提取的四环三萜类化合物，具有抗肿瘤、抗化学致癌、抗炎、保肝及调节机体免疫力等多种生物活性。有文献报道，CuE能有效抑制多种肿瘤细胞的增殖和迁移，并诱导其凋亡，但是否可以诱导结肠癌细胞Caco-2的凋亡目前还不清楚，基于肿瘤细胞的凋亡与癌症发展过程有着密切关联，本课题研究不同浓度CuE对结肠癌Caco-2细胞凋亡的影响，为今后结肠癌的临床治疗提供新的思路。 方法： 研究对象为人结肠癌细胞株 Caco-2，采用细胞水平和分子水平相结合的体外实验。 实验均设置空白对照组和给药组，给药组包含0.001、0.01、0.1、1和10μmol/LCuE组。 1.按上述分组分别处理Caco-2细胞24h、48h及72h，采用Hoechst33258染色法检测细胞核形态的变化。 2.按上述分组分别处理Caco-2细胞24h、48h及72h，采用TUNEL染色法测定细胞凋亡情况。 3.按上述分组分别处理Caco-2细胞24h、48h及72h，采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞分析法测定细胞凋亡率。 4.按上述分组处理Caco-2细胞24h，采用流式细胞分析法检测细胞周期的分布情况。 5.按上述分组处理Caco-2细胞24h，采用Western Blot法分别检测PARP、cleaved PARP、Caspase-3、cleaved Caspase-3及Bcl-2蛋白表达的变化。 结果： 1. Hoechst33258染色法和TUNEL染色法结果均显示：CuE能明显诱导Caco-2细胞凋亡(P<0.05)，并呈现出剂量及时间依赖性。 2. Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法结果表明：随着CuE浓度升高，凋亡细胞占总细胞比例明显升高(P<0.05)。 3.流式细胞仪检测细胞周期结果显示：CuE可改变Caco-2细胞周期的分布，随着 CuE浓度升高， G2/M期细胞所占比例显著升高(P<0.05)。 4.蛋白印迹分析结果显示，用 CuE处理 Caco-2细胞24h后， Caspase-3及PARP蛋白表达明显降低，而cleaved Caspase-3及cleaved PARP蛋白表达明显增加，同时Bcl-2蛋白表达也明显降低(P<0.05)。 结论： 1. CuE能明显引起人结肠癌细胞Caco-2发生凋亡，并呈现出剂量以及时间依赖性。 2. CuE能明显改变细胞周期分布，引起细胞G2/M期阻滞。 3. CuE能引起人结肠癌细胞Caco-2的Caspase-3及PARP蛋白表达明显降低，而cleaved Caspase-3及cleaved PARP蛋白表达明显增加，同时Bcl-2蛋白表达也明显降低。这表明，CuE诱导结肠癌细胞凋亡的分子机制可能与其抑制 Bcl-2表达，激活 Caspase-3，从而引起 PARP裂解有关。
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