摘要
第一部分载 HMME高分子增效剂的制备及性能检测 目的：制备载血卟啉单甲醚（HematoPorphyrin Monomethyl Ether, HMME）的聚乳酸-羟基乙酸（Poly-lactic-co-glycolic acid, PLGA）多功能增效剂（HMME/PLGA），检测其物理学、光学等一般特性；观察HMME/PLGA对卵巢癌SKOV3细胞的相关作用。 方法：采用双乳化法制备出HMME/PLGA，对其表面形态、内部结构、粒径、电位、包封率及载药量等一般特性进行检测。以 CCK8法检验不同超声处理时间(10 s、30 s、60 s、90 s)对卵巢癌 SKOV3细胞存活率的影响。实验分为5组：(I) cell(control group)，(II) US＋cell，(III) US＋PLGA＋cell，(IV) US＋HMME＋cell，(Ⅴ) US＋HMME/PLGA＋cell，治疗参数为（超声辐照声强0.50 W/cm2,频率1 MHz，IV组和Ⅴ组HMME浓度20μg/ml）。并于上述细胞毒实验基础上检测卵巢癌SKOV3细胞12 h、24 h、36 h、48 h的存活率。 结果： HMME/PLGA为较均匀的粉红色乳液，分散度较好。光镜及扫描电镜显示，HMME/PLGA呈球形，形态规则，大小较均匀，透射电镜下可见较多黑色的 HMME颗粒分布于外壳结构中。激光共聚焦显示HMME/PLGA表现出强烈的红色荧光。Malvern激光粒径仪检测出HMME/PLGA平均直径为357±0.72 nm(PDI=0.932)，Zeta电位为（?7.89 mV）mV。紫外-可见分光光度计检测出 HMME/PLGA在紫外-可见光区域有一个范围较宽的吸收光谱，除了在418 nm处有一个强的吸收光谱外，另外在500-700 nm之间(分别位于515,549,590,648 nm处)还有4个吸收光谱。HMME/PLGA包封率为（58.33±0.95）%，载药量为（4.73±0.15）%。HMME/PLGA对卵巢癌SKOV3细胞的急性细胞毒及抑制效应实验显示，(Ⅴ)（ US＋HMME/PLGA＋cell）组较其余各组能明显地降低 SKOV3细胞的存活率（P＜0.05），抑制肿瘤细胞的增殖活性（P＜0.05）。 结论：自制的HMME/PLGA高分子增效剂，形态规则、包封率较高，光学吸收性能良好，对卵巢癌 SKOV3细胞有明显的杀伤、抑制功能，是一种有诊疗一体化潜能的新型增效剂。 第二部分载 HMME高分子增效剂超声/光声显像研究 目的：观察 HMME/PLGA体内外增强超声及光声成像的效果，了解HMME/PLGA增强光声成像的能力及原理。 方法：体外成像部分以凝胶块作为模型，以光声成像仪分别对同等浓度的PBS、PLGA、HMME及HMME/PLGA进行超声图像检测，另外以波长为690 nm的脉冲激光激发，检测此四种样品的光声信号。以相同的方法对三种不同浓度(0.25 mg/ml,0.50 mg/ml,1.00 mg/ml)的HMME/PLGA进行超声及光声信号的观察。建立裸鼠卵巢癌模型10只，于肿瘤种植后约一个月，随机分为2组，分别经裸鼠尾静脉注入HMME/PLGA0.2 ml(HMME浓度为1.50 mg/ml),以波长为690 nm的脉冲激光激发，观察其对卵巢癌组织的超声及光声成像效果，了解其在卵巢癌组织的超声、光声信号强度随时间变化的关系等。 结果：在体外成像实验中，同等浓度的情况下，HMME/PLGA表现出了最强的超声信号，HMME和PLGA的超声信号强度没有明显的差别， PBS的超声信号强度最弱。HMME/PLGA光声信号最强，HMME次之，PLGA和PBS几乎没有光声信号。三种不同浓度的HMME/PLGA，浓度最大者表现出了最强的超声和光声信号，最小者超声及光声信号最弱。在裸鼠体内卵巢癌组织成像实验中，随着激光辐照时间的延长，肿瘤的光声信号不断增强。于同等情况下观察到的肿瘤超声信号虽有增强，但增强效果较不明显。 结论： HMME/PLGA具有体内外增强超声及光声双模态显像的能力，对卵巢癌的诊断具有潜在的应用价值。 第三部分载HMME/PLGA高分子增效剂增效HIFU治疗的研究 目的：观察HMME/PLGA体内外增效HIFU治疗的效果，探讨其相关增效机制。 方法：本部分研究分两部分进行。第一部分以离体牛肝作为模型，分为 PBS，PLGA， HMME和 HMME/PLGA四组。分别注入四组不同样品200μl后（HMME浓度分别为0.25 mg/ml,0.50 mg/ml,1.00 mg/ml)，以不同辐照声功率（120 W，150 W，180 W）和不同时间（3 s，5 s，10 s）的HIFU处理，处理后观察靶区灰度值的变化及凝固性坏死的体积、能效因子的不同，评价HMME/PLGA增效HIFU的效果。在第二部分实验中，建立裸鼠卵巢癌模型50只，随机分为HIFU，PBS＋HIFU，PLGA＋HIFU，HMME＋HIFU和 HMME/PLGA＋HIFU五组。HIFU组给予单纯HIFU辐照，后四组于肿瘤组织分别注射200μl PBS, PLGA, HMME和HMME/PLGA(HMME浓度为1.50 mg/ml)后给予HIFU定点消融,处理参数为120 w、5s。处理结束后观察消融区灰度变化值、凝固性坏死体积和能效因子、超微结构的变化、PCNA、TUNEL等的差别，评价HMME/PLGA增效 HIFU治疗肿瘤的效果。 结果：在第一部分体外实验中，与其余各组相比，HMME/PLGA组在同等实验条件下消融区灰度变化值和凝固性坏死体积最大，能效因子最小（P<0.05）。同样地在第二部分体内实验中， HMME/PLGA＋HIFU组消融区灰度变化值及凝固性坏死体积最大，能效因子最小（P<0.05）。微观检测显示，与对照组间相比 HMME/PLGA＋HIFU组消融区超微结构及PCNA、TUNEL表达差异明显（P<0.05）。 结论：体内外实验均显示自制载 HMME/PLGA高分子增效剂能有效增强 HIFU消融的治疗，证明其是一种有潜力的HIFU增效剂。
NETL