摘要
目的：本研究以同型半胱氨酸(Homocysteine Hcy)处理的HT22细胞作为细胞自噬模型，探讨硫化氢(Hydrogen sulfide H2S)是否可通过上调BDNF-TrkB通路拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞自噬。 方法：1、蛋白免疫印迹法（Western Bloting）法检测自噬相关蛋白LC3II/I比值、P62、Beclin-1蛋白的表达和电镜检测自噬结构确定Hcy是否能够诱导HT22细胞自噬，并建立细胞自噬模型，同时观察不同浓度的H2S是否有拮抗Hcy诱导的细胞自噬的作用。2、采用蛋白免疫印迹法（Western Bloting, WB）检测脑源性神经营养因子及受体（brain-derived neurotrophic factor，BDNF，Tyrosine kinase receptor B）蛋白的表达，观察不同浓度的Hcy对BDNF蛋白和p-TrkB/TrkB蛋白比值的作用，同时检测 H2S是否能上调 Hcy诱导自噬的 HT22细胞中BDNF蛋白、p-TrkB/TrkB蛋白比值的表达。3、采用BDNF-TrkB抑制剂（k252a）预处理NaHS及Hcy共处理的HT22细胞，Western Blotting检测细胞自噬相关蛋白LC3II/I比值、P62、Beclin-1蛋白的表达确定抑制剂k252a是否可以逆转H2S拮抗Hcy诱导HT22细胞自噬作用。 结果：1、Hcy诱导HT22细胞的自噬；Hcy（2.5、5、10 mmol/L）处理 HT22细胞24h后电镜检测自噬泡的数量呈浓度依赖性增加， WB检测自噬相关蛋白LC3II/I比值、Beclin-1蛋白表达呈现浓度依赖性上调，P62蛋白表达呈现浓度依耐性下调，以上表明Hcy可以诱导HT22细胞自噬。2、H2S拮抗Hcy诱导HT22细胞自噬；NaHS（100、200、400μmol/L）可浓度依赖性抑制Hcy（5mmol/L，24 h）诱导的HT22细胞中自噬泡数量的增加和自噬相关蛋白LC3II/I比和Beclin-1蛋白的上调、P62蛋白的下调，结果表明H2S可拮抗Hcy诱导的HT22细胞自噬。3、H2S通过上调BDNF-TrkB通路拮抗Hcy诱导的HT22细胞自噬；Hcy（2.5、5、10 mmol/L）处理HT22细胞24小时后检测BDNF蛋白、p-TrkB/TrkB蛋白比值呈浓度依赖性下调，表明Hcy可以抑制HT22细胞BDNF蛋白、p-TrkB/TrkB蛋白比值的表达。NaHS（100、200、400μmol/L，24 h）处理HT22细胞后浓度依赖性地上调 BDNF蛋白、p-TrkB/TrkB蛋白比值的表达。予以 NaHS（400μmol/L）预处理HT22细胞半小时，然后加入Hcy（5mmol/L）共同处理24小时，H2S可以逆转Hcy对HT22细胞BDNF蛋白表达的抑制和p-TrkB/TrkB蛋白比值的下调。予以K252a（10nmol/L）预处理NaHS、Hcy共处理的HT22细胞后，H2S拮抗Hcy诱导的HT22细胞自噬的作用被部分阻断，即相对于H2S保护组HT22细胞的自噬泡数量增加和自噬相关蛋白LC3II/I比值和Beclin-1蛋白表达上调及P62蛋白表达下调。此结果表明H2S通过上调BDNF-TrkB通路拮抗Hcy诱导的HT22细胞自噬。 结论：H2S通过上调BDNF-TrkB通路拮抗Hcy诱导HT22细胞自噬。
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