摘要
目的：苦参主要含有生物碱和黄酮两大类化学成分。目前，国内外对苦参的研究比较多，但大多集中在生物碱类成分，苦参黄酮类成分的研究较少。经前期研究证实，苦参碱和苦参醇提物具有镇静安神作用，从苦参安神有效部位中分离得到苦参碱和氧化苦参碱等生物碱，以及黄酮类成分和其它类成分。目前关于苦参黄酮类成分的镇静安神作用还未见有报道，本实验以苦参中的黄酮类成分为研究对象，提取分离苦参镇静安神作用有效成分中的黄酮类成分，研究其对中枢神经的作用，进一步阐述苦参的镇静安神作用。 方法：本实验采用系统溶剂对苦参进行提取分离;通过翻正反射法初步筛选出苦参中镇静安神有效部位;通过对苦参碱、氧化苦参碱以及黄酮类成分的展开剂和显色剂的对比观察，确立了苦参薄层色谱的检测条件，并且对苦参二氯甲烷镇静安神有效部位中的苦参碱、氧化苦参碱和黄酮类成分进行了检测;对苦参黄酮类成分的HPLC检测条件进行探索，在流动相的选择上分别考察了甲醇-水、乙腈-0.2％甲酸水溶液，在检测波长分别对280nm、320nm、360nm进行了筛选，并且建立了苦参各萃取部位的黄酮类成分色谱图;基于高效逆流色谱技术，对两项溶剂系统、流速、转速、实验温度分别进行考察，优化色谱条件，建立操作简便、稳定可重复的苦参提取物中黄酮类成分的分离方法，制备黄酮类成分;采用细胞实验对于苦参黄酮类成分的海马神经细胞作用进行研究。 结果：通过系统溶剂对苦参进行萃取得到苦参沉淀物（苦参1号）、苦参水提液二氯甲烷萃取物（苦参2号）、苦参水提液乙酸乙酯萃取物（苦参3号）、苦参水提物（苦参4号）、苦参醇提液二氯甲烷萃取物（苦参5号）、苦参醇提液乙酸乙酯萃取物（苦参6号）、苦参醇提物（苦参7号）;经整体动物实验筛选得到苦参提取物中镇静安神有效部位（P＜0.01），即为醇提二氯甲烷萃取部位（苦参5号）;确立了苦参碱、氧化苦参碱薄层色谱的检测条件，展开剂为二氯甲烷-甲醇-浓氨水(5∶0.6∶0.3)，显色剂为碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，能显示持久的橙色斑点;确立了黄酮类成分的薄层色谱检测条件，展开剂为石油醚-乙酸乙酯-甲醇溶液，显色剂为三氯化铝乙醇溶液，置紫外光(365nm)下能观察到清晰的斑点，并且检测到了苦参二氯甲烷镇静安神活性部位中的苦参碱、氧化苦参碱和黄酮类成分;建立了苦参黄酮类成分高效液相色谱方法，通过考察确立了乙腈-0.2％甲酸水为流动相，360nm为苦参黄酮类成分的检测波长，并且建立了苦参各萃取部位中黄酮类成分的色谱图;通过对苦参黄酮类成分的高速逆流色谱条件的研究，确定流动相为石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(1∶1∶1∶1)，转速：800r/min，流速：3ml/min，温度：25℃，检测波长365nm，采用高速逆流色谱分离得到2个单体成分以及多个组分，经黄酮薄层色谱法检测鉴定为苦参黄酮类组分（1-5号）;通过细胞实验证实苦参黄酮类组分3号与空白组比较有非常显著性差异(P＜0.01)，实验证明苦参黄酮类成分具有抑制海马神经细胞活性的作用。 结论：本实验通过整体动物实验证实苦参醇提二氯甲烷部位是苦参镇静安神有效部位;采用高速逆流色谱技术对其镇静安神有效部位进行分离得到了黄酮单体成分及多个黄酮组分;采用细胞实验研究证实苦参黄酮组分具有抑制海马神经细胞活性的作用。同时，还建立了测定苦参有效部位中苦参碱、氧化苦参碱薄层色谱、高效液相色谱的方法。
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