蓖麻矮化相关RcDof蛋白的纯化与晶体生长

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中文摘要：蓖麻(Ricinus communis L)是特殊的油料作物，矮秆蓖麻在单产较高、适合密植和机械化生产等方面具有显著优势。锌指蛋白是植物特有的一类转录因子，种类较多，Dof蛋白含有特异的单锌指DNA结合域，在植物生长发育中起重要作用，参与调控植株矮化。本试验克隆RcDof基因，利用原核表达系统对该基因进行原核表达和纯化，建立RcDof（44-101）表达纯化体系，获得大量高纯度的融合蛋白，筛选结晶条件，为RcDof结构与功能的研究及RcDof在植物中的作用分子机制研究提供一定的理论与试验依据。试验结果如下： 1.构建pETM-20-RcDof，pETM-30-RcDof，pETM-40-RcDof，pETM-50-RcDof和pETMBP-XE-RcDof(132-303)的原核表达载体。 2.将表达载体转入BL21（DE3）表达菌株中进行诱导表达，pETM-20-RcDof，pETM-30-RcDof，pETM-40-RcDof，pETM-50-RcDof所表达的蛋白均以包涵体的形式存在。尝试对包涵体进行了变复性纯化，但纯化结果无法满足后续试验要求，尿素浓度降低后，蛋白不可溶。pETMBP-XE-RcDof(132-303)以可溶的形式存在。 3.对RcDof（44-101）蛋白进行His亲和纯化，离子交换和分子筛层析纯化，得到高纯度的融合蛋白。 4.对RcDof(44-101)蛋白结晶条件进行筛选，发现其在0.2M Ammonium，0.1M BIS-TRIS，15%w/v Polyethylen glycol3350，pH为7.0的条件下有晶体产生，生长效果良好，晶体性质有待进一步验证。

作者：

李跃

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关键词：

蓖麻 RcDof基因蛋白纯化原核表达晶体生长

授予学位：

硕士

学科专业：

植物生物化学与分子生物学

导师：

陈永胜

学位年度：

2017

学位授予单位：

内蒙古民族大学

语种：

中文

中图分类号：