摘要
目的： 肺癌目前是我国拥有最高发病率以及最高致死率的恶性肿瘤，同时又由于肺的生理学特点使其成为各类肿瘤最容易发生转移的靶向器官，据统计在肿瘤患者中有超过90％的患者会发生远端转移[1]，其中56％发生了肺转移[2]。中医临床治疗肺癌不外乎扶正法、祛邪法、扶正祛邪法三种治则，本课题依据三种治则，选取8种复方单用或组合，评估其对肺癌原位模型小鼠抑制效果，以冀探索最优的治则治法和相应的方药。在此基础上，选择效果最优复方，进一步观察其对肿瘤肺转移模型小鼠的抑制作用，并研究其抑制作用的可能机制。 方法： 1、通过肺内注射LLC-Luciferase肺腺癌细胞以建立原位小鼠肺癌模型; 2、8个中药小复方（祛邪方:小陷胸汤、伸膈汤、三仙汤、小黄丸、抑痰丸、三圣丸;扶正方:玉屏风散、增液汤）单用或组合对原位肺癌模型小鼠进行干预，利用活体成像技术监测小鼠肿瘤生长情况，记录小鼠的体重变化和生存期，筛选抑制作用最好的复方。 3、通过骨髓注射LLC-Luciferase肺腺癌细胞以建立肺转移小鼠模型; 4、观察不同药物比例的玉屏风散对肿瘤肺转移模型小鼠的抑制作用。分玉屏风散（2∶2∶1或3∶1∶1）治疗组和生理盐水对照组，利用活体成像技术监测模型小鼠肿瘤生长情况，记录小鼠体重变化和生存期。进而收集其肺组织，进行印度墨水肺部灌充以观察肺部肿瘤转移灶。 5、玉屏风散(3∶1∶1)抑制肿瘤肺转移的机制研究。从对照组和玉屏风散(3∶1∶1)组的小鼠脾脏中分离出单核淋巴细胞以用于细胞毒性试验及CD107a脱颗粒试验来检测经不同处理后小鼠脾细胞的杀伤能力的变化。 6、将小鼠体内NK细胞敲除，继续观察玉屏风散对肺转移模型小鼠的肿瘤抑制作用（脾细胞杀伤实验），小鼠生存期，以及将小鼠肺组织灌流后观察肺的大体解剖图。 7、构建肺癌转移模型后随机设对照组和玉屏风散组，测量小鼠体重。血清测定其肝肾的生化功能指标(ALT、AST、ALB、Cr)。将小鼠处死后，测量肝质量，计算肝指数;肝肾组织病理切片HE染色观察病理改变以评估玉屏风散用药安全性。 结果： 1、通过肺内注射法成功构建了小鼠肺癌原位模型，取模型小鼠的肺组织做HE染色发现确实有肿瘤组织结构，从病理学角度证实了原位肺癌模型的成功建立，同时还能使用活体成像系统灵敏监测小鼠体内肿瘤生长情况。 2、在肺癌原位模型的基础上，筛选了祛邪方:小陷胸汤、伸膈汤、三仙汤、小黄丸、抑痰丸、三圣丸;扶正方:玉屏风散、增液汤等8个中药小复方以及其组合方，最终发现祛邪方三仙汤及扶正方玉屏风散具有明显延长小鼠生存期的作用，同时玉屏风散对模型小鼠的体重无影响。 3、通过小鼠胫骨骨髓注射成功建立了肺转移肿瘤模型。取模型小鼠的肺组织及胫骨骨髓组织做HE染色发现确实有肿瘤组织结构存在，从病理学角度证实了小鼠肺转移模型的成功建立，同时还能使用活体成像系统灵敏监测小鼠体内肿瘤生长情况。 4、玉屏风散(2∶2∶1)治疗组对肺转移模型小鼠无论是原发的胫骨骨髓肿瘤还是肺转移肿瘤均无明显的抑制作用，但玉屏风散(3∶1∶1)治疗组对模型小鼠的肺转移却有显著的抑制作用，并且还能明显延长其生存时间。 5、玉屏风散(3∶1∶1)通过增加NK细胞在脾细胞中的数量及增强其脱颗粒的水平以提高了小鼠脾细胞的细胞杀伤活性。 6、当小鼠NK细胞被敲除后，经玉屏风散(3∶1∶1)处理后的小鼠脾细胞的细胞杀伤活性几乎被完全逆转，以及其延长小鼠生存期的作用和对模型小鼠肺转移的抑制作用都随之丧失。 7、小鼠在接受玉屏风散治疗后，无论是玉屏风散(2∶2∶1)还是玉屏风散(3∶1∶1)，其小鼠的精神状态、毛发、活动能力等大体情况均好于生理盐水对照组，并且小鼠的体重、肝质量、肝指数与对照组相比也无明显差别，此外，小鼠的肝肾生化功能指标(ALT、AST、ALB、Cr)及病理组织学结构变化与对照组相比几乎也都无差别。 结论： 在（祛邪方:小陷胸汤、伸膈汤、三仙汤、小黄丸、抑痰丸、三圣丸;扶正方:玉屏风散、增液汤）等8个中药小复方及其组合方中筛选出扶正方玉屏风散可明显延长原位肺癌模型小鼠的生存期，并且玉屏风散(3∶1∶1)还可明显延长经骨髓注射而构建的肿瘤肺转移模型小鼠的生存期，其潜在机制可能是玉屏风散(3∶1∶1)通过提高小鼠脾脏中NK细胞的数量以及其介导的细胞杀伤作用。此外，玉屏风散用药安全性好，对小鼠体重以及肝肾功能没有明显影响，日后有望于成为临床上治疗肺癌转移的辅助用药。
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