摘要
目的：研究Epo对缺氧缺糖神经元减少凋亡的保护作用及其相关信号通路机制。 方法：乳鼠皮质神经元原代分离培养并进行map2免疫荧光鉴定。建立神经元OGD损伤模型，流式细胞仪（AnnexinV/PI染色法）检测细胞凋亡率鉴定模型。加入不同浓度的Epo干预，流式细胞仪检测各浓度Epo作用下细胞凋亡率，寻找最佳Epo干预浓度。实验分组：①对照组：正常皮质神经元；②模型组：OGD损伤模型；③Epo组：OGD损伤模型+Epo（最佳浓度）；④LY294002组：OGD损伤模型+Epo+LY294002（PI3K-Akt通路阻断剂）；⑤U0126组：OGD损伤模型+Epo+U0126（Erk1/2通路阻断剂）。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，Rt-PCR检测各组Bax、Bcl-2的mRNA转录水平，Western blot检测各组Akt、p-Akt、Erk、p-Erk和Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表达。 结果：1. Epo可以降低神经元OGD损伤模型的细胞凋亡率（P<0.05），并且在Epo浓度为12.5U/ml时的保护作用最强（P<0.05）。2. OGD组相较于对照组细胞凋亡率上升（P<0.05）；Bax mRNA、Bcl-2 mRNA转录增强（P<0.05）；Akt、Erk、Bcl-2蛋白表达无差异（P>0.05），p-Akt表达下降，p-Erk、Bax和Caspase-3表达上升（P<0.05）。3. Epo组相较于OGD组Bax mRNA转录减弱，Bcl-2 mRNA转录增强（P<0.05）；Akt、Erk蛋白表达无差异（P>0.05），p-Akt、Bcl-2表达上升，p-Erk、Bax和Caspase-3表达下降（P<0.05）。4. LY294002组相较于Epo组细胞凋亡率上升（P<0.05）；Bax mRNA转录增强，Bcl-2 mRNA转录减弱（P<0.05）；Akt蛋白表达无差异（P>0.05），p-Akt、Bcl-2表达下降，Bax和Caspase-3表达上升（P<0.05）。5. U0126组相较于Epo组细胞凋亡率下降（P<0.05）；Bax mRNA转录减弱，Bcl-2 mRNA转录无差异（P>0.05）；Erk蛋白表达无差异（P>0.05），p-Erk、Bax和Caspase-3表达下降，Bcl-2表达上升（P<0.05）。 结论：Epo是通过调控PI3K/Akt和Erk1/2信号通路来有效抑制缺氧缺糖诱导的神经元的凋亡。
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