摘要
目的：研究复方中药（银菊散结颗粒、复方中药一、复方中药二和复方中药三）对实验性甲减小鼠甲状腺功能减退及常见并发症的治疗作用，以及复方中药对实验性自身免疫性甲状腺炎功效以及免疫调节作用，观察复方中药一初步临床疗效。采用CETSA实验验证，银菊散结颗粒中的小分子药物和靶标蛋白TS HR有结合。利用药效团模型，从银菊散结颗粒中筛选TSHR激动剂，探讨其作用机制。 方法： 1.复方中药的提取 采用60%乙醇浸提法提取复方中药一、复方中药二和复方中药三。 2.复方中药治疗实验性甲状腺功能减退的药效学研究 采用化学诱导法制成甲减模型。化学发光法检测甲状腺激素水平；HE染色观察病理变化；Morris水迷宫和疲劳仪评估行为学变化。 3.复方中药治疗自身免疫性甲状腺炎的药效学研究 采用抗原佐剂免疫诱导法制成小鼠 EAT模型。化学发光法检测 TPOAb、TgAb以及甲状腺激素水平；HE染色观察病理变化；ELISA检测TNF-α和IL-10；IHC检测TNF-α、IL-10以及TGF-β1。以TPOAb、TgAb、TSH、FT4和FT3水平变化为指标，初步观察复方中药一对桥本氏甲状腺炎患者的临床疗效。 4.复方中药的作用靶点及有效组分的初步研究 利用CETSA实验，检验复方中药银菊散结颗粒是否和TSHR蛋白有结合。 通过已知的激动剂构建药效团模型，并进行模型验证，从复方中药银菊散结颗粒中筛选TSHR激动剂。 结果： 1.复方中药的提取 复方中药一、复方中药二和复方中药三中药提取物为干粉，提取率分别为21%、24%和22%。 2.复方中药治疗实验性甲减的药效学研究 和空白组相比较，造模组血清 FT4下降、TSH水平上升显著，平均潜伏期增加，到达平台的只数百分率下降，跑步时间显著缩短（P<0.05）。和造模组相比较，各治疗组血清FT4均有所上升；TS H水平显著降低，其中复方中药一高、低剂量组，复方中药二高剂量组和复方中药三高剂量组作用效果显著（P<0.05）；治疗组平均潜伏期缩短；到达平台的只数百分率上升，其中阳性对照药银菊散结颗粒，复方中药一高剂量组和复方中药二高剂量组上升显著（P<0.05）；各治疗组跑步时间增加，其中，复方中药一、二高剂量组增加跑步时间作用显著（P<0.05）。病理结果显示：和空白组相比，造模组甲状腺组织滤泡上皮肥大，胶质减少显著。各治疗组和造模组相比较，上皮细胞肿大程度减轻，胶质增多。 3.复方中药治疗实验性自身免疫性甲状腺炎的药效学研究 和空白组相比，造模组血清TgAb、TPOAb、TNF-α水平都升高，血清FT4、IL-10水平降低，甲状腺组织TGF-β1、TNF-α表达增加，IL-10表达减少（P<0.05）。和造模组相比，各治疗组TgAb、TPO Ab、TNF-α水平均降低（P<0.05）；FT4、IL-10水平均升高，其中，各治疗组IL-10水平均升高（P<0.05）；各治疗组TGF-β1、TNF-α均显著表达减少，IL-10均表达增加（P<0.05），银菊散结颗粒高剂量，复方中药一高剂量组效果更好。病理结果显示：和空白组相比，造模组淋巴细胞浸入程度显著增多（P<0.05）。和造模组相比，各治疗组淋巴细胞浸入程度降低（P<0.05）。其中，复方中药一高剂量组，复方中药三高剂量组更为显著。 复方中药一对HT患者的临床总有效率60%，优于对照组。 4.复方中药的作用靶点及有效组分的初步研究 CETSA实验 TSHR蛋白热稳定性提高。表明，复方中药银菊散结颗粒和TSHR蛋白有结合。 通过验证药效团模型，激动剂检出率为50%，且该模型的GH打分为0.875，进一步从银菊散结颗粒的小分子数据库中筛选出26个化合物。 结论： 1.四种复方中药可以改善实验性甲减小鼠的甲状腺功能。 2.四种复方中药能够减轻甲减并发记忆障碍以及疲劳。 3.三种复方中药可以降低EAT自身抗体，减少淋巴细胞浸润。 4.三种复方中药能有效调节EAT小鼠免疫功能，逆转Th1/Th2极化偏移。 5.复方中药一对HT患者疗效较好，优于对照组。 6. CETSA实验证明，银菊散结颗粒中的小分子和TSHR蛋白有结合。 7.通过构建TSHR激动剂的药效团模型及其验证，从复方银菊散结颗粒的中药小分子数据库中虚拟筛出化合物。
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