摘要
目的：以红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）为研究对象，紫草素和特比奈酚为阳性对照药，探讨地锦草有效成分鞣花酸抗红色毛癣菌活性，研究其对真菌细胞超微结构、细胞凋亡及其细胞生物合成相关基因表达量的影响，阐明其抗真菌作用的机制，为深入研究鞣花酸抗红色毛癣菌靶位和其开发利用奠定基础，为其临床应用治疗皮肤癣菌病提供科学依据。 方法：⑴采用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案（M38-A），测定地锦草有效成分鞣花酸及其不同提取部位对4株红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）、石膏样毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes）、白色念珠菌（Candida albicans）、近平滑念珠菌（Candida prapsilosis）临床常见真菌的MIC值，确定其抗真菌谱，筛选出对其敏感的真菌菌株。参考MIC结果，进一步测定鞣花酸对红色毛癣菌细胞生长抑制率。⑵鞣花酸作用于红色毛癣菌（T.rubrum）后，按常规方法进行样品处理，利用扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM），观察其对红色毛癣菌细胞表面形态结构的影响。⑶鞣花酸作用于红色毛癣菌后，分离菌丝样品，经过洗涤、染色等样品前处理后，设低（64μg·mL-1）、中（128μg·mL-1）、高（256μg·mL-1）剂量组，采用AinexinV-FITC/PI双染法考察其对红色毛癣菌细胞凋亡的影响。⑷鞣花酸作用于红色毛癣菌后，采用RT-PCR方法检测其对真菌细胞膜麦角甾醇生物合成通路有关ERG11、SUB1、MEP4、ERG6等基因表达的影响。 结果：①鞣花酸对念珠菌的平均MIC值为256μg·mL-1、对石膏样毛癣菌的平均MIC值为128μg·mL-1，其中对红色毛癣菌最为敏感，平均MIC值为64μg·mL-1。地锦草有效部位对红色毛癣菌（T. rubrum）、石膏样毛癣菌（T. mentagrophytes）的平均MIC值大于1024μg·mL-1，对近平滑念珠菌（C. parapsilosis）、白色念珠菌（C. albicans）的平均MIC均大于2048μg·mL-1；②扫描电子显微镜（SEM）下观察，鞣花酸（64μg·mL-1）作用于红色毛癣菌后真菌细胞表面皱缩不平，明显变形膨胀，且可见表层剥离，菌丝破裂，呈粘糊状，细胞内容物溢出；③鞣花酸作用于红色毛癣菌后，鞣花酸低、中、高浓度的细胞坏死率依次为：16.6%、20.6%、27.3%。④鞣花酸低、中、高剂量的诱导下MEP4、SUB1和ERG11基因的表达量下调分别为0.1526、0.0726、0.0585，0.2093、0.1331、0.0857，0.0791、0.0423、0.0400等不同浓度的鞣花酸对ERG6的上调表达量分别为2.6950、4.1398、4.8764。差异有显著性（P＜0.05）。 结论：鞣花酸具有显著的抗真菌活性，对浅部致病真菌有较强的抑制作用，其中对红色毛癣菌最敏感。可抑制红色毛癣菌生长，通过破坏真菌细胞膜的结构，诱导其坏死，其机制可能是麦角甾醇生物合成相关的MEP4、SUB1、ERG11基因相对表达量的下调，ERG6基因相对表达量的上调有关。
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