摘要
目的：探讨SD大鼠骨髓间充质干细胞对胶质瘤C6细胞增殖、迁移和侵袭特性的影响,为深入研究 SD大鼠骨髓间充质干细胞作为胶质瘤基因治疗载体的生物安全性提供实验依据。 方法：1.采用全骨髓贴壁法获取SD大鼠骨髓间充质干细胞并进行原代、传代培养和形态学观察。2.通过成脂诱导分化和成骨诱导分化鉴定 SD大鼠骨髓间充质干细胞多向分化潜能，采用流式细胞仪鉴定SD大鼠骨髓间充质干细胞表面标记物。3.通过SD大鼠骨髓间充质干细胞和胶质瘤C6细胞Transwell非接触共培养获得Con、A1-3、A2-3、A3-3四组胶质瘤C6细胞用于后续实验。4.通过CCK-8试验检测 OD值和平板克隆实验检测克隆数明确胶质瘤 C6细胞增殖特性的改变；通过划痕实验检测迁移距离明确胶质瘤 C6细胞迁移特性的改变；通过Transwell侵袭实验明确胶质瘤C6细胞侵袭特性的改变。5.通过裸鼠体内成瘤实验进一步验证 SD大鼠骨髓间充质干细胞对胶质瘤 C6细胞增殖特性的影响。 结果：1.第三代SD大鼠骨髓间充质干细胞形态均匀，呈梭形，旋涡状生长。2.第三代SD大鼠骨髓间充质干细胞成脂诱导21天，用油红O染色脂滴呈鲜红色，圆形，位于胞浆，大的脂滴排列成串、小的脂滴排列簇。成骨诱导分化21天矿化钙结节经茜素红染色后呈橘红色。3.第三代SD大鼠骨髓间充质干流式细胞仪检测结果提示：CD29,CD90高表达，阳性率分别为95.32%和99.97%；CD34,CD45低表达，阳性率分别为0.08%和0.32%，由此验证提取细胞是SD大鼠骨髓间充质干细胞，且纯度较高。4. CCK-8实验提示在24h、48h、72h、96h Con、A1-3、A2-3、A3-3四组胶质瘤C6细胞增殖活力呈依次递减趋势（P<0.001）。平板克隆实验提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四组胶质瘤 C6细胞平板克隆14天 GIMSA染色后计数，克隆形成数呈依次递减（F=190.218，P<0.001）。划痕实验提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四组胶质瘤C6细胞24h迁移距离（um）呈依次递增（F=1010.726，P<0.001）。Transwell侵袭实验提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四组胶质瘤C6细胞48h侵袭率呈依次递增（F=5150.74，P<0.001）。5.裸鼠体内成瘤14天提示Con、A1-3、A2-3、A3-3四组细胞形成肿瘤体积依次减小（F=90.46，P<0.001）。 结论：1.采用全骨髓贴壁法可获取纯度较高的SD大鼠骨髓间充质干细胞。2. SD大鼠骨髓间充质干细胞能抑制胶质瘤C6细胞体外和体内增殖能力。3. SD大鼠骨髓间充质干细胞能促进胶质瘤C6细胞的侵袭和迁移能力。
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