摘要
目的： 急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia，AML）是起源于骨髓造血干、祖细胞的恶性克隆性疾病。FLT3/ITD突变是AML中重要的基因突变之一，也是提示疾病预后不良的重要标志。该类患者常规化疗疗效差，目前AML伴FLT3/ITD突变患者靶向药物治疗成为人们的研究热点，并且在临床应用上取得一定的疗效。然而已有的靶向治疗的耐药和缓解后再复发成为AML伴FLT3/ITD突变病人治疗的一大难题，因此寻求新的治疗药物及新的作用靶点十分必要。近年来中药雷公藤因其抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等多种药理作用，备受国内外学者关注。雷公藤甲素（TP）是雷公藤主要活性成分之一，相关文献研究报道显示，TP不论对急性髓系白血病细胞株HL60还是对慢性髓系白血病 K562、K562G01细胞均有明显增殖抑制作用。那么 TP对FLT3/ITD突变的MV411细胞是否也有增殖抑制作用？其可能作用机制又是如何？本课题通过体外实验的方法观察 TP对 MV411细胞的增殖抑制、凋亡作用及PI3K-AKT-mTOR通路相关基因FLT3、PTEN、PI3K、AKT、mTOR表达，初步探讨其可能的抗肿瘤机制，为AML伴FLT3/ITD突变患者的治疗提供理论依据。 研究方法： 1四甲基偶氮唑蓝实验（MTT）测定不同浓度的TP在24h，48h，72h对MV411细胞株的增殖抑制情况，并测算IC50值； 2流式细胞仪测定48h，72h的细胞凋亡率； 3实时荧光定量PCR检测PI3K-AKT-mTOR通路相关基因FLT3，PTEN，PI3K， AKT，mTOR的表达水平。 研究结果： 1.MTT检测结果示：TP对MV411细胞有明显增殖抑制作用，且随着药物浓度和用药时间的增加而逐渐增强，呈现时间-剂量依赖性，选择48小时为TP的IC50，值为16.92nmol/L。 2.流式细胞仪检测结果示：48小时时间点0、10、20nmol/L TP对应的平均早期凋亡率分别为（3.30±0.20）%、（17.10±0.36）%、（35.67±0.61）%；72小时时间点0、10、20nmol/L TP对应的平均早期凋亡率分别为（7.37±0.32）%、（49.33±0.40）%、（68.92±0.11）%。发现细胞凋亡率随着浓度的增加而增加。 3.实时荧光定量 PCR检测结果示：选用0、5、10、20nmol/L的TP作用于MV411细胞48h后，运用实时荧光定量 PCR法检测，发现 FLT3、PI3K、AKT、mTOR的mRNA水平下降，PTEN的mRNA水平升高，且呈现出剂量依赖性。 结论： 1.TP对MV411细胞有明显增殖抑制作用，呈现时间-剂量依赖性； 2.TP可以诱导MV411细胞凋亡； 3.TP作用于MV411细胞，FLT3、PI3K、AKT、mTOR的mRNA水平下降，PTEN的mRNA水平升高。TP可能是通过影响PI3K-AKT-mTOR通路上相关基因表达，诱导肿瘤细胞凋亡。
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